摘要：目的：为进一步完善提高荠菜饮片的质量标准，对其粉末显微特征和薄层色谱鉴别方法进行研究。方法：采用光学显微镜对荠菜饮片的粉末显微特征进行研究，并以亮氨酸和缬氨酸为对照品、荠菜为对照药材，进行薄层色谱鉴别。结果：显微鉴别观察的特征明显，其中非腺毛、气孔可作为荠菜的主要鉴别点。采用薄层色谱硅胶G板，稀乙醇为提取溶剂，超声处理20 min，以正丁醇-冰乙酸-水（体积比4︰1︰1）为展开剂，以茚三酮试液为显色剂，105℃加热后置日光下检视，所得薄层色谱图斑点清晰，分离度较好。结论：方法稳定性高、操作易行、重复性好，可为荠菜饮片的粉末显微特征及薄层色谱鉴别制定质量标准提供实验依据。
关键词：荠菜,显微特征,薄层色谱
荠菜记载于历代医书典籍，其名称有荠、鸡心菜、护生草、净肠草等，为十字花科植物荠菜Capsella bursa-pastoris(L.)Medic.的干燥全草。生长在田间、路旁或者菜地，分布全国各地，现有栽培[1]。荠菜始载于《名医别录》[2]，味甘、淡，性凉，归肝、脾、膀胱经[3-5]。研究表明，荠菜主要含有氨基酸类、黄酮类、生物碱类等成分[1，5，6]，具有清热利湿、平肝明目、凉血止血、和胃消滞的功效[3-5]，是一种常见的药食用源中药材。历代文献记载荠菜的炮制方法主要为净制、切制，部分文献记载“烧灰，能治赤白痢”等制法。荠菜在我省制剂生产及临床应用较为广泛,是山楂内金胶囊、补血调经片等常用中成药的主要原料之一。
目前，2020年版《中国药典》[7]等国家药品标准中未收载荠菜，在其他省的中药材标准及中药饮片炮制规范中有所记载，2003年版《河北省中药饮片炮制规范》[3]虽然有收载，但该版标准收载的内容只有性状、显微鉴别、杂质检查等，缺少薄层色谱专属性的检验检测项目，无法有效保障其质量的稳定性和可控性，不利于饮片质量控制和产品开发。薄层色谱法是药品检验检测机构、药品生产经营部门质检人员检验中成药及中药材的常用方法之一，因其操作简单、广谱高效、专属性强等优势得到普遍认可[8-10]。因此，本研究对不同产地批次的荠菜粉末显微特征进行观察，对薄层色谱鉴别方法及耐用性进行了考察研究，以期为该品种的鉴别和提高质量标准提供科学参考。
1仪器与材料
1.1仪器
EX125DZH电子天平，奥豪斯仪器常州有限公司；BX-53显微镜、DP-73显微数码摄像系统，OLYMPUS公司；SK7210LHC超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；LINOMAT 5半自动点样仪、TLC VISUALIZER 薄层色谱存档系统，CAMAG 公司）。
1.2材料
荠菜对照药材，批号：71125，规格：1 g，上海诗丹德标准技术服务有限公司；亮氨酸对照品，批号：140687-202206，规格：100 mg，含量：99.9%，中检院；缬氨酸对照品，批号：140681-202204，规格：100 mg，含量：99.8%，中检院；薄层板为市售硅胶G预制板，产地分别为德国MN公司（批号：605131）、德国Merck公司（批号：HX20436626）、烟台市化工研究所（批号：20210308）、青岛海洋化工有限公司（批号：20220406）。试剂试药均为分析纯，水为纯化水。
1.3样品
采购荠菜饮片共12批，主要来自河北康典药业有限公司、安国润德药业有限公司等中药材加工企业及河北安国、安徽亳州的药材市场，来源广泛，包含了荠菜生产、经营等主要环节。收集到的样品经我所鉴定均为正品。
2方法与结果
2.1粉末显微鉴别
2.1.1实验方法
取荠菜饮片，粉碎后粉末过四号筛，置日光下观察粉末的颜色，记录，挑取少量置于载玻片上，滴加水合氯醛，加热透化，盖盖玻片，放冷，置显微镜下观察。
2.1.2实验结果
本品粉末呈黄绿色或灰绿色。非腺毛多为单细胞，3～5分枝，呈海星状，细胞壁具疣状突起；也有单细胞非腺毛长而平直，细胞壁薄。叶表皮细胞壁薄，呈不规则形，壁波状弯曲；气孔不定式，副卫细胞3~4个，不等式。茎表皮细胞类长方形或长多角形，壁平直，壁薄；气孔不定式。花粉粒类圆形或类三角形，有3个萌发孔，具细小颗粒状雕纹。导管多为螺纹导管。见图1。结果表明，来自不同产地批次的12批荠菜饮片均能观察到上述的显微特征，表现出较强的稳定性和一致性，可以用于荠菜饮片的定性鉴别，有利于实现对荠菜饮片质量更为有效的管理。
2.2薄层色谱鉴别
2.2.1供试品溶液的制备
取荠菜饮片粉末0.5 g，加稀乙醇25 mL，超声处理20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加稀乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
2.2.2对照药材溶液的制备
取荠菜对照药材0.5 g，同2.2.1方法制成对照药材溶液。
2.2.3对照品溶液的制备
取亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加稀乙醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。
2.2.4实验方法
依照《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各2~5μL、对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（体积比4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，105℃加热至斑点显色清晰。观察并记录样品、对照药材和对照品在薄层色谱上所显示的斑点。
2.2.5实验结果
结果表明，不同产地批次的荠菜饮片样品在与对照药材色谱和对照品色谱相对应的位置上，均显相同颜色的斑点，表明具备较好的专属性和一致性。见图2。
2.2.6耐用性考察
按2.2.4节方法实验，分别考察在不同的薄层板（国产预制板与进口预制板）、不同温度及不同相对湿度条件下展开对实验结果的影响。
2.2.6.1薄层板的考察
分别选用3个不同厂家批次的薄层板，按照拟定条件提取展开显色，结果表明，使用不同来源的薄层板，荠菜饮片样品与对照药材色谱中各斑点均得到较 好分离，无明显差异。见图3-1—图3-3。
在温度10～30℃、相对湿度19%～63%的环境条件下，按照拟定条件进行实验，结果表明薄层色谱展开效果均较好，故温度及相对湿度对荠菜薄层鉴别无较大影响。见图3。
3结果讨论
3.1粉末显微特征
在中药材及饮片质量标准的方法建立中，显微鉴别法因其具有简便快捷、廉价有效、经济环保等优点，一直以来被广泛的应用。荠菜为全草类药材，此次研究是在现行标准基础上继续观察完善其显微特征，方法简便易行，为荠菜饮片粉末显微鉴别提供了实验依据，其中非腺毛、气孔等特征鉴别意义较大，尤其海星状非腺毛的显微特征具有较强的专属性，这一特征在其他药材中鲜有，可作为荠菜的主要鉴别点。
3.2薄层色谱条件的考察
实验过程中考察了乙醇及稀乙醇两种提取溶剂，结果表明稀乙醇的提取效果更佳，显示斑点更为清晰；对点样量进行了考察，得知对照品溶液的点样量为2μL时斑点大小比较适宜，供试品及对照药材溶液的点样量由于不同批次斑点各不相同，因此拟定为2～5μL酌情点样；通过对文献的调研，对不同的展开系统进行了比较，结果显示正丁醇-冰乙酸-水（体积比4∶1∶1）比正丁醇-冰乙酸-水（体积比19∶5∶5）展开分离效果稍好，后者薄层色谱图中各斑点的Rf值较接近，不易区别，展开效果不理想；同时还考察了不同温度、相对湿度以及不同类型薄层板，结果发现斑点无明显差异，说明该方法受温度和相对湿度的影响并不大，该方法耐用性较好。此外，在实验环境及条件均相同的情况下，12批荠菜饮片的薄层色谱图所显示的斑点大小深浅不一，推测可能与荠菜药材的采集地点和时间相关，但都能满足本实验的要求。
3.3对提升现行质量标准的思考
2003版《河北省中药饮片炮制规范》收载荠菜的内容仅有性状及显微鉴别等，无法满足该饮片在市场生产流通中对其质量控制需求，使其用药安全存在隐患，同时也阻碍了资源的开发利用与发展。本研究参考2020版《中国药典》第四部通则（0502）薄层色谱法及其他省中药材标准、中药饮片炮制规范等文献，建立荠菜饮片薄层色谱鉴别方法，所得薄层色谱图斑点清晰，分离度较好，易于检出，重现性好，为科学制定和完善荠菜质量标准提供借鉴，利于有效控制荠菜饮片的品质。目前，我们研究的荠菜饮片薄层色谱鉴别方法已经作为炮制规范一部分被收录到新版《河北省中药饮片炮制规范》（第二批），可用于荠菜饮片的质量控制。
参考文献
[1]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编（上册）：第2版[M].北京：人民卫生出版社，1996：629-630.
[2]陶弘景.名医别录[M].北京：人民卫生出版社，1986：95.
[3]河北省食品药品监督管理局.河北省中药饮片炮制规范：2003年版[M].北京：学苑出版社，2004：95.
[4]江苏省药品监督管理局.江苏省中药饮片炮制规范（第一册）[M].南京：江苏凤凰科学技术出版社，2020：316-320.
[5]国家中药管理局编委会.中华本草（第三册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：697-699.
[6]江苏新医学院.中药大辞典下册[M].上海：上海人民出版社，1977：2164-2166.
[7]国家药典委员会.《中国药典》2020年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2020.
[8]孙红霞，王鸿昌.薄层色谱法在中药检验中的质量分析[J].中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生，2022（2）：264-267.
[9]方艳鸯.研究薄层色谱法在中药检验中的质量分析[J].中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生，2023（8）：40-42.
[10]范姝姝，徐海军，杜维俊，等.薄层色谱法检测大豆皂苷的条件优化[J].山西农业科学，2021（1）：17-20.
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