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摘要：目的初步探讨华法林剂量相关基因CYP2C9 1075A/C多态性在江西汉族人群中的流行病分布情况，为指导临床合理使用华法林药物提供理论依据。
方法收集某医院神经内科及心内科门诊常规口服华法林药物的江西汉族患者340例，收集外周静脉血1ml，采用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法检测CYP2C9 1075A/C，统计CYP2C9 1075A/C分布情况。
结果在江西汉族人群中发现了属于CYP2C9基因的AA和AC两种基因类型，AA的分布频率为89.71%，AC的分布频率为10.29%，等位基因A与C的频率分别为94.85%、5.15%。
结论CYP2C9 1075A/C多态性在江西汉族人群中存在比较广泛，在临床使用华法林药物时，应常规进行CYP2C9 1075A/C检测，合理调整华法林使用剂量。
关键词：江西汉族人群；华法林；CYP2C9基因；分布情况
本文引用格式：吴春华，王伟.江西汉族人群中华法林剂量相关基因CYP2C9 1075A/C多态性分布情况研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(27):32-33.
Study on the Distribution of CYP2C9 1075A/C Polymorphism of Warfarin Dose-related Gene in Han Nationality in JiangxiWU Chun-hua,WANG Wei△(Emergency Department of Ninth People’s Hospital Affiliated to Medical College of Shanghai Jiaotong University,Shanghai)
ABSTRACT:Objective To investigate the epidemiological distribution of warfarin dose-related gene CYP2C9 1075A/C polymorphism in Jiangxi Han population,and to provide a theoretical basis for the rational use of warfarin in clinical practice.
Methods 340 patients of Han nationality in Jiangxi Province who took warfarin orally in neurology department and cardiology department of a hospital were collected.Peripheral venous blood was collected for 1ml.
CYP2C9 1075A/C was detected by PCR-RFLP method.The distribution of CYP2C9 1075A/C was counted.
Results Two genotypes of AA and AC belonging to CYP2C9 gene were found in Jiangxi Han population.The distribution frequency of AA,AC and allele A and C were 89.71%,10.29%and 94.85%and5.15%respectively.Conclusion CYP2C9 1075A/C polymorphism is widespread in Jiangxi Han population.When warfarin is used clinically,routine CYP2C9 1075A/C testing should be carried out to rationally adjust the dosage of warfarin.
KEY WORDS:Jiangxi Han population;Warfarin;CYP2C9 gene;Distribution
0引言
华法林（Warfarin）是一种广泛应用于临床疾病治疗的抗凝药物，目前多在神经内科和心内科等科室中应用[1，2]。目前临床上较多应用的消旋华法林中的主要成分即为S-华法林也就是左旋华法林[3]。
华法林在进入人体后主要通过细胞色素P450 2C9（Cytochrome P450,CYP 2C9）进行代谢，对于亚州人群和我国汉族人群来说最为常见的是以CYP 2C9 1075A>C突变情况，对此有相关研究结果证实：CYP2C91075A>C多态性突变与个体间华法林剂量差异化之间的关系是最为紧密的[4，5]。
由此指出CYP2C9 1075A>C多态性突变在临床治疗疾病用药方面的作用重大。本研究主要目的是明确在江西省汉族人群中CYP2C9 1075A>C多态性的分布情况，从而促进华法林在江西省人群中开展用药治疗的规范性与合理性，为广大患者造福。
1资料与方法
1.1研究资料
研究对象选取的是某医院神经内科和心内科门诊中实施华法林治疗的江西汉族患者，共计纳入340例，全部患者均自愿加入本次研究并签署同意书。其中包括男性患者与女性患者分别为185例与155例，患者年龄为40-68岁。
1.2实验仪器与试剂
由美国Corbett Life Science公司提供的Rotor-Gene 6000荧光PCR仪。由美国ABI公司提供的ABI 3730 xl测
序仪。高保真PCR MIX（Takara公司，日本），DNA Marker及DNA血液提取试剂盒（Qiagen公司，美国）[6]。
1.3样本采集及DNA提取
所有入选患者取静脉血1ml，采样后24h内,按照Qiagen公司口拭子DNA抽提试剂盒说明书进行DNA提取，将提取的DNA应用紫外分光光度计分别实施定量和纯度检验，并在-20℃的冰箱中保存备用[7]。
1.4检测CYP2C9 1075A>C突变
（1）PCR引物设计与合成，见下表：（2）PCR反应体系：在每个0.2ml eppendorf管中依次加入：2.5μl模板，10μl 5×PCR缓冲液，主要配置为：100mmol/L Tris-HCl,pH8.3,250mmol/L KCl,50mmol/L MgCl2，5mmol/L EDTA,5mmol/L NAD+,0.5%(v/v)Triton X-100,热启动酶1μl,引物混合液5μl,10×Eva Green5μl,去离子水26.5μl，总反应体系为50μl。混合后实施常规扩增操作，一共进行30个循环。
（3）限制性内切酶消化及电泳分型检测
待PCR反应完毕，然后通过2%琼脂糖凝胶电泳，Gold View核酸染料染色检测得到理想的片断后，再实施酶切反应。
将30μl酶切反应体系+含PCR产物10μl+1.5μl限制性内切酶+3μl 10X酶切缓冲液充分进行混合后放在37度环境下4h，经过4%琼脂糖凝胶电泳，Gold View核酸染料染色后得出检测结果。
判定酶切结果：PCR产物大小为131bp,若得到的为野生型，直接切成110bp、21bp，对于21bp片段当采检个体为野生型时纯合子显示110bp一条带，如为突变纯合子则只显示131bp一条带，杂合子显示为110bp、131bp[8，9]。
1.5统计学分析
数据统计应用SPSS13.0统计学软件进行分析，采用2进行检测，判断P值。
2结果
2.1CYP2C9基因没有发现CC型，只发现了AA型与AC型，AA型分布频率为89.71%，AC型分布频率为10.29%，等位基因A的频率为94.85%，等位基因C的频率为5.15%，具体分布情况见表1。
PCR-RFLP 检测结果示意图见图 1。
3讨论
目前药物遗传学备受关注，相关研究较多。CYP2C9是细胞色素P450酶的重要组成部分之一，并参与到肝微粒体中药物代谢过程中。
相关研究结果显示：CYP2C9基因具有遗传多态性[10，11]。当前野生型CYP2C9*1，突变型CY-P2C9*2和突变型CYP2C9*3这三种类型比较常见，也是研究最多的[5]。
有很多研究都证实了：不同人种之间CYP2C9多态性频率是不同的。具体来分析，比较不同人种的突变率情况，白种人显著高于黄种人与黑种人。
并且所有的突变类型并不是在所有人种中的，野生型纯合子在白种人和土耳其人群中只有2/3的人存在，剩余那部分人为*2或*3的杂合子；而CYP2C9*2等位基因在美国黑人和东亚人群中就不存在，与这些人种没有必然联系[12]；
在我国，CYP2C9*2等位基因只存在于新疆维吾尔族人群中，频率为3%，在我国的其他人群中并没有发现CYP2C9*2的等位基因的存在[13].
由此，本文着重检测CYP2C9*3也就是1075A/C，在本研究中被纳入的研究资料1075A>C纯合突变体，只有35例经过检测证实为1075A与C杂合突变，等位基因频率为10.92%，相比之前耿启彬等2012年报道的广东地区的7.9%要稍微高一些[14]，但是与何震宇2006年报道的心脏瓣膜置换术后长期服用华法林病人的18.18%要低，而这项检查结果和以前得到的CYP2C9突变存在人种差异的研究结果是具有相似性的。
本研究检测了在我国江西省人群中CYP2C9 1075A/C等位基因情况，结果显示其在江西地区人群中存在一定的分布频率，相关研究结果已经证实过携带有该突变的个体在应用华法林治疗的时候发生不良反应概率会更高，所以在患者接受华法林药物治疗的过程中进行了CYP2C9基因分型检测，根据检测结果确定对患者应用华法林药物治疗过程中的应用剂量与用药时间情况，以规范临床用药行为，确保合理、安全用药，减少不良反应的发生率，这对临床个性化用药具有一定的指导作用，意义重大。
参考文献
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