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摘 要：目的 建立测定益气止渴丸中梓醇含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Apollo-C18 柱， 流动相为乙腈 -0.12% 磷酸溶液（0.9:99.1，V/V），流速为 0.9 mL/min，柱温为 30℃，检测波长为 210 nm，进样量为10 μL。结果 梓醇的检测浓度在2.014-20.14 μg/mL 范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r =0.9994），平均加样回收率为 98.6%，RSD=1.93（n =6）。结论 该检验方法简便、专属、准确、重复性好，可以用于益气止渴丸中梓醇的含量测定。
关键词： 益气止渴丸；梓醇；高效液相色谱法；含量测定
本文引用格式：孙立丽, 裴明日 , 霍秦秦, 等. 高效液相色谱法测定益气止渴丸中梓醇的含量 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(99):129+209.
0引言
益气止渴丸是吉林省长春市内某医疗机构内部研发的， 车间生产的中药品种，是复方制剂。由地黄、天花粉、葛根、麦冬、甘草等七味中药组方而成。具有益气生津，润燥养阴， 培本降糖的功效。主要用于 II 型糖尿病之多饮、多食、多尿， 消瘦乏力、视物昏花、肢体麻木疼痛等病证。组方中重用地黄， 为君药，而地黄的主要有效成分之一为梓醇，所以多数情况下都以梓醇作为地黄成方制剂的质量控制指标。因此，本实验采用反相高效液相色谱法测定益气止渴丸中梓醇的含量。
1仪器与试药
LC-2030 型 HPLC 仪， 紫 外 检 测 器；METTLER TOLEDO AG135 型电子天平：
益气止渴丸（为吉林省长春市内某医疗机构制剂室研发部门提供，规格：每瓶装 60 g，批号：20171001、20171002、20171003）；梓醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110808-200306）；乙腈（美国 Fisher 公司， 色谱纯）；甲醇（美国 Fisher 公司，色谱纯）；水（市售娃哈哈纯净水）[1]。
2方法与结果
2.1色谱条 件。色谱 柱：CAPCELL PAK- C18 柱 (250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：乙腈-0.12% 磷酸溶液（0.9:99.1， V/V）； 流速：0.9 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm；进样量：10μL。在此色谱条件下，梓醇与相邻杂质峰的分离度均大于 1.5，理论板数按梓醇峰计算为 5000。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备：取梓醇对照品适量，精密称定， 置50 mL 容量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加甲醇稀释至刻度， 摇匀，制成每 1 mL 中含梓醇 0.2014 mg 的溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备：取益气止渴丸适量，研细，取约3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL， 称定重量，置水浴上加热回流 1.5 h，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至 10 mL 容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0.45 μm 的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备：按益气止渴丸处方配比及制备工艺，取除处方中地黄外的其它药材，按照益气止渴丸的制备工艺制备，制成无地黄的阴性样品粉末，再按“2.2.2”项 供试品溶液制备的处理方法制备阴性对照溶液，结果表明空白对照溶液在梓醇出峰时间处无干扰，选择的方法具有合理性。取上述三种溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入高效液相色谱仪，色谱图见图 1。
2.3线性关系考察。精密称取梓醇对照品 10.07 mg，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述梓醇对照品溶液各 1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，置 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取 10 μL 注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件进行分析。以峰面积积分值为纵坐标（y），质量浓度为横坐标（x，μg/mL）绘制标准曲线， 得到回归方程 y=1505.4x+190.99（r=0.9994）。结果表明， 梓醇检测浓度在 2.014-20.14μg/mL 范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4精密度试验。取同一份按照“2.2.1”项下制备的梓醇对照品溶液（浓度为 0.2104 mg/mL）适量，按照“2.1”项下色谱条件进行分析，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表 1。
平均：317307，RSD=0.7%，结果表明该方法的精密度良好。
2.5稳定性试验。取同一份按照“2.2.2”项下制备的供试品溶液适量，分别放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h 后按照“2.1” 项下色谱条件进行分析，进样量 10 μL，结果见表 2。
结果，平均：222902，RSD=1.4%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。
2.6重复性试验。精密称取同一供试品（批号：20171002） 适量，按照“2.2.2”项下制备的供试品溶液方法平行制备5 份供试品溶液，依照“2.1”项下色谱条件测定，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果，供试品中梓醇含量的 RSD=1.3%，表明本方法的重复性较好。
2.7加样回收率试验。取已测含量的益气止渴丸适量（批号： 20171003），共 6 份，研细，取 1.5 g，精密称定，分别精密加入梓醇对照品溶液（浓度为 0.2014 mg/mL）10.0 mL，按照“2.2.2”项下方法制备的供试品溶液，并按照“2.1”项下 色谱条件测定，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，测定并计算回收率，结果见表 3。
2.8样品含量测定。取上述 3 批样品适量，按照“2.2.2” 项下的供试品溶液制备方法进行配制，精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪 [2]。另取梓醇对照品溶液（浓度为 0.2014 mg/mL）适量，依据“2.1”项下色谱条件测定，进样量 10μL，按外标法以峰面积计算供试品中梓醇的含量。20171001 含量 为 1.3621 mg/g；20171002 含量 为 1.4234mg/g； 20171003 含量为 1.3928 mg/g。
3讨论
中药是我国的国粹，数千年的应用历史，为我国留下了辉煌灿烂的中药文化。近年来，人们越来越关注中药的使用， 患者越来越多的开始服用中药产品。中药对于减轻病人的症状和痛苦，提高生存质量，延长生命，有重要的意义。中药治疗还有五大特点，①具有较强的整体观念；②可以弥补手术治疗、放射治疗、化学治疗的不足；③不影响劳动力；④ 副作用小；⑤经济。益气止渴丸是吉林省地方医院临床上应用较多的中成药，对于治疗 II 型糖尿病疗效比较显著，受到很多患者的青睐。本研究建立了一种简便、快捷、可靠的分析方法，为益气止渴丸的质量控制提供了理论依据 [3]。
3.1色谱条件的优化。由于梓醇在 210 nm 的波长处出现最大吸收峰，所以选择 210 nm 作为检测波长。此波长接近甲醇的末端吸收，因此试验选择了乙腈作为有机溶剂。考察了两种流动相：乙腈 -0.12% 磷酸溶液（0.9:99.1，V/V）和乙腈 - 水（0.9:99.1，V/V），结果从色谱图上看出前者的分离效果更好。
3.2提取溶剂的选择。考察了加热回流提取方法和冷浸法、超声处理方法，并且考察不同溶剂（水、甲醇、乙醇）提取， 提取时间（30 分、40 分、50 分、1 h），提取溶剂的体积（25 mL、50 mL、100 mL），结果表明，最优化的提取方法是甲醇溶剂 25 mL 加热回流提取 1.5 h。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国人民共和国药典( 一部 )[M]. 北京: 中国医药科技出版社,2015.
[2]葛海生, 姚红伟, 王晓飞, 等.HPLC 法测定甘麦宁心胶囊中梓醇的含量[J].中国民族民间医药,2014,23(20):10-11.
[3]封宣伊, 姜宇, 左亚杰.高效液相色谱法测定一贯煎颗粒中梓醇的含量[J]. 湖南中医杂志,2013,29(02):132-134.
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