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摘要：目的 分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响情况。方法 通过使用硝普钠（snP）方式制作出兔膝骨关节炎模型， 数量为 80 例。将其分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组不做任何处理，低、中、高剂量组分别使用不同剂量的马钱子处理，观察对软骨细胞凋亡和增殖的相关影响。结果 对照组凋亡率最高，随着马钱子剂量的提升，凋亡率显著降低。同时细胞增殖 od 值也随着马钱子剂量提升而提升，差异均显著（P<0.05）。结论 马钱子能够明显降低关节炎软骨细胞的凋亡并提升细胞增殖效率，有较高应用价值。
关键词：马钱子；骨关节炎；软骨细胞；凋亡与增殖
本文引用格式：吴建方 . 分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响 [J]. 世界最新医学信息文摘,2018,18(77):167,175.
0引言
当前在对关节炎患者实施临床治疗时，马钱子是比较常见的药物类型。并且在实际的治疗中，通过使用马钱子也往往能够取得较好效果，对于患者而言有着相当重要的意义 [1]。但需要注意的是，马钱子对骨关节炎软骨细胞凋亡以增殖的影响，实际上并不明确。因此当前在对骨关节炎的治疗中，马钱子的使用也并不广泛。在这样的前提下，通过分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响，并找出其具体影响的方式和机制非常重要，对临床治疗也有着较大意义 [2-3]。本研究即通过制作兔膝骨关节炎模型的方式，分析了马钱子对于骨关节炎软骨细胞凋亡和增殖的具体影响，报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1材料和仪器
本研究使用硝普钠（国药准字 H20143166，河南省宛西制药股份有限公司），规格 50mg/ 支。2 日龄新西兰兔，我院动物房提供。德国产甲苯胺蓝。中国药品生物制品鉴定所生产的马钱子碱，规格 20mg/ 支。仪器为美国 BB5060 二氧化碳培养箱，规格 50mL/L。EPICS XL MCL 流式细胞仪。日本 JEM-1230 透射电镜。
1.1.2骨关节炎软骨细胞模型
软骨细胞系为自行制作的兔膝骨关节炎模型，数量为 80 例。需无菌操作取得家兔软骨，加入少量的 100g/L 的 FCS DEME 培养液，将其剪碎为 1×1mm2，在 500r/min 条件下离心 5min 处理，将上清液清除后放入到烧瓶中，加入消化液处理3h，消化后将细胞悬液进行离心处理，速度 1600r/min，时间为5min。将上清液丢弃后接入到培养瓶中，放置在 50mL/L 的培养箱中进行培养，每隔 2~3d 需换液，本研究为三四代传代细胞，并且已经使用甲苯胺蓝染色鉴定确定其存在。同时需使用SNP 诱导软骨细胞凋亡模型。将其随机分为4 组，即对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组均 20 例。
1.2方法
需要对本研究的所有骨关节炎中软骨细胞模型进行马钱子的处理，在本研究中需要使用马钱子碱。软骨细胞需要按照每个孔中 1×105 个细胞，种植在 24 孔板中，在培养体系中分别加入 2mol/L 的 SNP，并且分别对其进行孵育 12h、24h以及 48h，手机细胞对其实施流式细胞仪的监测。同时需要在低剂量组中加入 125mg/L 的马钱子碱，在中剂量组中加入 250mg/L 的马钱子碱，在高剂量组中加入 500mg/L 的马钱子碱。最后可对细胞的凋亡以及增殖情况进行检测。在本研究中，使用透射电镜的方法进行形态观察，即需要将细胞进行收集，并且离心成为细胞团块，使用 25g/L 的戊二醛对其进行固定处理，时间为 2h，并使用 10g/L 的四氧化锇进行再固定，时间为 1.5h，使用梯度丙酮进行脱水处理，并应用环氧树脂浸透包埋，使用超薄切片机进行切片，并在染色后使用电子透射电镜进行观察，使用流式细胞仪检测，分析细胞的凋亡率以及增殖 OD 值。
1.3观察指标
观察本研究中 4 组骨关节炎中软骨细胞的凋亡率以及增殖 OD 值。
1.4统计学分析
本研究使用 SPSS20.0 软件进行统计学的分析，计量资料用均数 ± 标准差（ ±s）表示，采用 t 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义。
2结果
2.1形态分析
通过对形态进行分析后显示，细胞呈现出单层铺满的特点，并且在显微镜下显示呈现出梭形和多角形，细胞之间呈现出网状的特点，在密集位置可发现旋涡情况，使用甲苯胺蓝染色后显示呈现出异染性的特点。而在对其使用 SNP 诱导后显示，镜下呈现出软骨细胞膜完整的特点，细胞表面的微绒毛也有明显减少甚至消失，细胞浆较为致密，细胞器也比较完整，核染色质浓缩，在细胞核膜内部界限分明，细胞整体体积有所降低。
2.2细胞凋亡和增殖的情况
通过本研究显示，对照组凋亡率最高，随着马钱子剂量的提升，凋亡率显著降低。同时细胞增殖 OD 值也随着马钱子剂量提升而提升，差异均显著，如表 1 所示。
3讨论
当前在临床对关节炎患者实施临床治疗时，马钱子是非常常见的药物，并且也能够取得较好的治疗效果。马钱子为马钱的干燥种子，一般在冬季可采收其成熟果实，并且取出种子晒干入药 [4-5]。在临床治疗时，使用马钱子能够取得较好的临床疗效，并且在当前临床治疗时也开始得到了越来越广泛的使用。
马钱子中的有效成分为马钱子碱。马钱子碱能够起到通络止痛以及消肿散结的效果，在实际的治疗中，能够通过马钱子碱的方式改善其疼痛症状，从而让患者能够较好地面对治疗以及之后的护理 [6-7]。
但需要注意的是，当前在临床上对于马钱子治疗骨关节炎的研究仍然比较少。虽然已经将马钱子中的有效成分马钱子碱进行提取，并且将其制作成为马钱子散和腰痛舒等药物治疗，但马钱子碱能够取得的具体效果并不明确，因此对马钱子的治疗效果进行分析非常重要。
本研究对马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响进行了分析。通过本研究显示，在对骨关节炎中软骨细胞凋亡模型进行马钱子碱的处理后，发现模型的凋亡率有明显降低，同时增殖 OD 值有显著提升，而这种趋势随着马钱子碱的计量提升而加剧，由此可见，使用大剂量的马钱子能够对骨关节炎起到较好保护效果。
综上所述，在对骨关节炎患者实施临床治疗时，使用马钱子进行治疗能够取得安全有效的治疗效果，可有效抑制细胞凋亡，并促进细胞增殖，有较高使用价值。
参考文献：
[1]唐迎雪 , 梁晓东 , 李茜 , 等 . 马钱子配伍苏木对佐剂性关节炎大鼠炎症反应及血液流变学的影响 [J]. 中华中医药学刊 ,2017,35(3):522-525.
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[3]张董喆 , 孙曙光 , 李伟 , 等 . 制马钱子对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用的实验研究 [J]. 中医学报 ,2015,30(4):539-541.
[4]孙响波 , 于妮娜 , 杨子东 , 等 . 马钱子配伍苏木对佐剂关节炎模型大鼠滑膜组织 Cor、CIC 的影响 [J]. 山东中医药大学学报 ,2013,37(5):428-430.
[5]宋晓亮 , 刘强 , 李晓东 , 等 . 马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响 [J]. 中国医药指南 ,2013,11(19):10-11.
[6]徐军 , 刘强 , 宋晓亮 , 等 . 马钱子碱液关节腔内注射对兔膝关节损伤软骨的影响 [J]. 中国医药指南 ,2013,11(18):9-10.
[7]方芳 , 陈海波 , 马凤森 , 等 . 马钱子生物碱组分对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖作用的比较研究 [J]. 浙江中医药大学学报 ,2013,37(1):1-4.
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