微针阵列作用对复方脱氧熊果苷涂剂体外透皮吸收的影响论文

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摘要：目的研究空心微针阵作用于猪皮对复方脱氧熊果苷涂剂体外透皮吸收的影响。方法采用HPLC和改良Franz扩撒池法，以空心微针阵列处理的离体腹部猪皮为试验屏障，空心微针组与对照组于0.5、1、2、4、8、12 h时分别取样测定，计算药物累积透过量、猪皮药物滞留量和透皮速率。结果脱氧熊果苷和烟酰胺的标准曲线分别为y=4962.9x-891.92，R2=0.9995，线性范围5.0~100.0μg/mL；y=1273.5x+1475.1，R2=0.9995，线性范围5.0~100.0μg/mL。12 h时与对照组比较，空心微针组中的脱氧熊果苷和烟酰胺的累积透过量分别提高了37.40%、43.65%；透过速率分别提高了34.26%、41.94%，其药物累积透过量线性方程均符合零级模型。结论空心微针阵列作用于猪皮均有利于复方脱氧熊果苷涂剂中烟酰胺、脱氧熊果苷的透皮吸收，为其应用于经皮给药提供依据。

关键词：脱氧熊果苷；烟酰胺；微针阵列；透皮吸收

本文引用格式：陈彦彪,唐骢,余楚钦,等.微针阵列作用对复方脱氧熊果苷涂剂体外透皮吸收的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(78):12-14.

Effect of Microneedle Array on Transdermal Absorption of Compound Deoxyarbutin Coatings in Vitro

CHEN Yan-biao1,TANG Cong1,YU Chu-qin2,WEI Jia-bao2,QIU Si-wa2,LI Yuan-xin2*

(1.Guangzhou Nali Biological Technology Co.,Ltd.,Guangzhou Guangdong;2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou Guangdong)

ABSTRACT:Objective Studying the effects of the transdermal absorption of compound deoxyarbutin liquid paint on pig skin disposed by hollow microneedle arrays.Methods The test was conducted with HPLC and modified Franz diffusion cell method by using the isolated abdominal pig skin pretreated by microneedle arrays as abarrier;the samples of drug-administered group and the control drug-administered grouptaken at 0.5,1,2,4,8 and 12h were detected respectively to calculate the cumulative drug permeation,pig skin drug retention and transdermal rate.Results The standard curve ofdeoxyarbutinand nicotinamidewasy=4962.9x-891.92,(R2=0.9995,range of 5.0-100.0μg/mL),y=1273.5x+1475.1,(R2=0.9995,range of 5.0-100.0μg/mL),respectively.At 12 h,the cumulative permeation of deoxyarbutinand nicotinamideof the hollow microneedle group was 37.40%and 43.65%higher than that of the control grouprespectively,Thetransdermal rate of the microneedle group was increased by 34.26%and 41.94%respectively;The linear equations of cumulative drug permeation were in accordance with the zero-order model.Conclusions The effect of hollow microneedle arrays on pig skin is beneficial to the transdermal absorption of nicotinamide and deoxyarbutin in compound deoxyarbutin coating.The role of hollow microneedle array is more significant,which provides a basis for application by transdermal absorption.

KEY WORDS:Deoxyarbutin;Nicotinamide;Microneedle array;Transdermal absorption

0引言

脱氧熊果苷具有强烈的抗氧化作用，通过竞争性抑制酪氨酸酶、多巴色素巨变酶、DHICA氧化酶、内皮素，从而抑制黑色素的形成，最终阻断合成黑色素的途径，达到美白皮肤的作用[1]。烟酰胺为水溶性维生素，是辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ的组成部分，参与黑素的转运过程并能加快黑素细胞中黑素小体的运动速率[2]，阻隔其向表层细胞的转移[3]，可减少皮肤色素沉着、改善面部皮肤衰老、预防光免疫抑制[4]。微针阵列作用可以只刺入皮肤的浅层而不触及富含神经的皮肤深层组织，实现无痛、微创和高效经皮给药[5]。目前研究表明，脱氧熊果苷、烟酰胺均有美白肌肤、延缓肌肤衰老的作用，但未见其复方制剂与微针联合应用的研究报道，本文采用改良Franz扩撒池和高效液相色谱法（HPLC），以离体的腹部猪皮为渗透屏障，研究空心微针阵列对复方脱氧熊果苷涂剂透皮吸收的影响，为其应用于经皮给药提供研究资料。

1仪器与试药

Waters2996高效液相色谱仪（Waters）；YB-P6智能透皮试验仪（天津药典标准仪器制造厂）；超纳微晶美肤仪及其配套空心微针（广州纳丽生物科技有限公司）；DW-8 6 W100卧式超低温保存箱（青岛海尔特种仪器有限公司）；KDC-1 40 HR高速冷冻离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司)；BP2 11 D电子天平（赛多利斯）；KQ-5 00 M超声清洗机（东莞市科起声波设备有限公司）。烟酰胺原料药（江西兄弟医药有限公司，批号：201801003，纯度99%）；烟酰胺对照品（中国食品药品检定研究院，批号100115-200703，纯度99.9%）；脱氧熊果苷原料药（对照药）（Hubei Artec Biotechnology Co.，Ltd，批号：20170106 D，纯度≥99%）。透明质酸（东营佛思特生物工程有限公司，批号：SH20161215c，23万级）；甲醇为分析纯，水为去离子水。广西巴马小型乳猪，3月龄，约20 kg，广州南方医大实验动物科技发展有限公司提供，生产许可证：S CXK（粤）2016-0041。

2方法与结果

2.1涂剂的制备

按优化确定的处方工艺，称取水溶性脱氧熊果苷包合物4.5g、烟酰胺2.5g、玻璃酸钠0.3g、甘油1.5g、PEG-26甘油醚2g、苯氧乙醇0.7g，搅拌混合均匀，加入去离子水88.5g，充分搅拌使溶解完全，密封、避光保存。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件

色谱柱：Phenomenex Gemini C18(4.6mm×250 mm，5µm)，流动相：甲醇-水（60:40），流速：1.0mL/min，检测波长：280nm，柱温：30℃，分析时间：10min。

2.2.2透皮接收液的制备

准确称取氯化钠0.9 g，用适量水溶解，再加入30 mL甲醇并用水定容至100.0 mL，即得30%甲醇生理盐水。

2.2.3对照品溶液的制备

精密称取烟酰胺对照品、脱氧熊果苷对照药分别置于50.0 mL棕色量瓶中，用30%甲醇溶解并定容制成74g/mL和90g/mL的对照品溶液；准确移取上述对照品溶液各25 mL混合均匀，作为混合对照品溶液。

2.2.4供试品溶液的制备

称取复方脱氧熊果苷涂剂适量（约相当于烟酰胺、脱氧熊果苷分别为2.5mg和0.5mg），置于25.0 mL量瓶中，加入透皮接收液至刻度，摇匀，作为供试样品溶液；同法制备含有涂剂各种辅料，不含烟酰胺和脱氧熊果苷二种药物的空白阴性样品溶液。

2.2.5系统适应性

分别取阴性样品溶液、烟酰胺对照品溶液、脱氧熊果苷对照药溶液、混合对照品溶液和供试样品溶液适量，用0.22m滤膜过滤，吸取10l进样测定，记录色谱图，烟酰胺峰、脱氧熊果苷峰与相邻其它峰可达到基线分离，分离度大于1.5，板数大于5 000，结果见图1。






2.2.6标准曲线的制备

精密称取烟酰胺对照品、脱氧熊果苷对照药，用30%甲醇溶解制成浓度均为10.0mg/mL的混合对照品溶液；准确移取混合对照品溶液，用30%甲醇配制成浓度分别为5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0、100.0g/mL的混合对照品溶液，分别用0.22m滤膜过滤，吸取10l进样，以峰面积（y）对浓度（x）进行回归，得回归方程：脱氧熊果苷y=4962.9x-891.92，R2=0.9995，烟酰胺y=1273.5x+1475.1，R2=0.9995，结果表明烟酰胺、脱氧熊果苷在5.0~100.0g/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7精密度试验

取2.2.3项混合对照品溶液，用0.22m滤膜过滤，分别吸取10l，接连5次进样，记录峰面积，结果烟酰胺、脱氧熊果苷的RSD分别为0.44%、0.43%，表明仪器的精密度良好。

2.2.8稳定性试验

取2.2.4项供试样品溶液，用0.22m滤膜过滤，在0，2，6，12，a 18 h分别取10l进样，记录峰面积，结果烟酰胺、脱氧熊果苷的RSD分别为0.16%、0.57%，表明供试样品溶液在10h内稳定。

2.2.9加样回收率

精密称取2.2.4项供试品溶液共6份，精密加入与所取供试品中待测成分含量80%、100%、120%的对照品溶液，按供试样品溶液的制备方法处理并进样测定，计算回收率，烟酰胺的平均回收率为102.53%，RSD为2.6%，脱氧熊果苷的平均回收率为101.26%，RSD为2.9%。结果表明本测定方法准确可靠。

2.3离体猪皮的制备

将巴马小型乳猪放血处死，观察无皮肤红肿、充血、破损等现象。剃毛剥取腹部猪皮，小心除去皮下组织，用生理盐水洗净，置-70℃冰箱中冷冻，备用。

b2.4透皮吸收试验取出经2.3项处理好的腹部猪皮，在常温下解冻，切成所需小块，用生理盐水洗净并用滤纸吸干猪皮上下表面的水分，称重后摊平使其表皮角质层向上。吸取0.6mL复方脱氧熊果苷涂剂，用超纳微晶美肤仪及其配套的方形空心微针，按微针枪使用方法，以垂直表面2~3N力持续作用于猪皮60秒，称猪皮重量并作好增重记录，取经空心微针作用过的猪皮固定在Franz扩散池，使表皮角质层朝上，猪皮下表面接触扩散池液面，作为空心微针组。直接用处理好的离体腹部猪皮作为对照组，按体外经皮渗透试验[6,7]要求进行体外透皮吸收试验，在接收池中加满30%甲醇生理盐水，37±0.1℃水浴加热，在定速磁力搅拌（300±5r/min）条件下平衡1h，向供给室补足0.6mL复方脱氧熊果苷涂剂，用密封胶封口，以防溶剂蒸发。分别于0.5、1、2、4、8、12h移取接收液1.0mL，用0.22m滤膜过滤，随即补回1.0mL备用接收液，吸取10l进样，计算药物累积透过量，以药物累积透过量对时间进行回归，所得线性方程的斜率为透皮速率，结果见图2和表1~2。




2.5猪皮药物滞留量

透皮试验12h后拆除扩散池装置，取出试验过的空心微针组和对照组的腹部猪皮，用蘸水棉签擦干净猪皮表面残留的药物制剂，剪取给药部位猪皮，剪碎后用适量甲醇浸泡，超声30min，补回失去的甲醇，摇匀，离心10min（1000r/min），取适量用0.22m滤膜过滤，吸取10l进样，计算透皮吸收试验12h的猪皮药物滞留量，结果见表2。

结果表明，透皮试验12h，空心微针组的烟酰胺、脱氧熊果苷的药物累积透过量大于对照给药组。试验12h空心微针组的药物累积透过量比对照给药组，脱氧熊果苷和烟酰胺分别提高了37.40%、43.65%，表明空心微针阵列作用于猪皮有利于复方脱氧熊果苷涂剂中烟酰胺、脱氧熊果苷的体外透皮吸收，其药物累积透过量线性方程均符合零级模型，空心微针组的透皮速率比对照给药组，脱氧熊果苷和烟酰胺分别提高34.26%、41.94%，12h时各组猪皮的药物滞留量无显著性差异。

3讨论

皮肤表层中的角质层是阻碍外用药物的透皮吸收的主要屏障，微针阵作用于皮肤表面可以刺穿表皮的角质层，在皮肤中形成微小的通道，增加药物的渗透[8]；而空心微针还通过微注射输送药物，具有注射给药和透皮给药的双重优势，能更好增加大分子药物的吸收，对于肌肤除皱、修复，改善面部色素等问题具有很好的疗效[9,10]。与传统皮肤给药方式相比，微针还结合了中医针灸学、穴位疗法的优势，使其疗效会更快、高效、稳定且无痛、安全、顺应性高、低成本，将替代传统透皮给药应用于临床[11]。

脱氧熊果苷、烟酰胺为美白化妆品的添加剂，脱氧熊果苷通过竞争性抑制“三酶一素”,能有效地抑制皮肤中的生物酪氨酸酶活性，阻断黑色素的形成，通过自身与酪氨酸酶直接结合，加速黑色素的分解与排泄，烟酰胺在生物氧化呼吸链中起着递氢的作用，可促进生物氧化过程和组织新陈代谢，抑制黑素体向皮肤表面迁移，从而减少皮肤色素沉积，祛除色斑和雀斑。目前以脱氧熊果苷作为添加剂的化妆品己经在美国、中国台湾等地上市[12]。

以脱氧熊果苷、烟酰胺为活性成分，中等分子量的透明质酸钠作增稠、保湿剂制备的复方脱氧熊果苷涂剂，肤感较好，若采用空心微针阵列作用于皮肤，可激发带动下游血小板生长因子、转化因子α和β以及成纤维细胞等系列生长因子的释放，从而起到修复创伤、改善美白肌肤的作用[13]。

参考文献

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