磺丁基醚-β-环糊精流动相添加法拆分尼莫地平对映体论文

SCI论文（www.lunwensci.com）:

摘要：目的采用磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)作为流动相添加剂，建立反相色谱法分离尼莫地平对映体的方法。考察了环糊精的种类、浓度、有机改性剂的种类和浓度、pH值、柱温、流速等因素对对映体分离的影响。方法采用HypersilBDSC8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为水（pH2.5，含25mmol•L-1SBE-β-CD）-乙腈（58:42，V/V）；流速0.8 ml•min-1；检测波长为235nm；进样量为20μl；柱温20℃。结果在优化的色谱条件下，尼莫地平对映体达到完全分离，分离度R为1.6，分离因子α为1.1。结论该方法操作简单，比手性固定相法更经济适用。并拓展了SBE-β-CD在HPLC中作为手性流动相添加剂拆分对映体的应用。

关键词：手性流动相添加剂；磺丁基醚-β-环糊精；尼莫地平；对映体分离

本文引用格式：刘尧,刘莹,孙睿.磺丁基醚-β-环糊精流动相添加法拆分尼莫地平对映体[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(70):17-18.

Separation of Nimodipine Enantiomers by Sulfobutyl Ether-Beta-Cyclodextrin Mobile Phase Addition

LIUYao1,LIUYing1,SUNRui2

（1 Dalian Pharmaceutical Inspection and Testing Institute，Dalian，Liaoning；2 Dalian Market Supervision Service Center，Dalian，Liaoning）ABSTRACT:Objective The enantiomeric separation of nimodipine enantiomers by reversed phase high performance liquid chroma-tography with Sulfobutyl ether-β-cyclodextrin as a chiral mobile phase additive was established.The effect of some factors such as type and concentration of cyclodextrin and organic modifier，pH of aqueous phase,column temperature and flow rate on the resolution was investigated.Methods Separation was performed on Hypersil BDS C8 column(150 mm×4.6 mm,5μm)with mobile phase composed of water(pH 2.5,containing 25 mmol•L-1 sulfobutylether-β-cyclodextrin)-acetonitrile(58:42,V/V);The flow rate was 0.8 ml•min-1 and the detection wavelength was set at 235 nm;The injection volume was 20μl;The column temperature was 20℃.Results Baseline separation of nimodipine was achieved under the optimized condition(R=1.6;α=1.1).Conclusion The method is simple and economic with good resolution.At the same time,use of Sulfobutyl ether-β-cyclodextrin on enantiomeric separation in HPLC was expanded.

KEY WORDS:Chiral mobile phase additives;Sulfobutyl ether-beta-cyclodextrin;Nimodipine;Enantiomer separation

0引言

尼莫地平为第二代钙离子受体拮抗剂，临床用于高血压病的治疗。文献报道二氢吡啶类钙拮抗剂的对映体药理活性有很大差别。因此研究尼莫地平对映体的拆分方法具有重要意义[1]。已有文献报道用HPLC手性固定相法[2，3]、毛细管电泳法[4，5]等拆分尼莫地平对映体。毛细管电泳法重现性较差，而手性固定相法价格昂贵，通用性较差。相比而言，手性流动相添加剂法具有易操作、成本低等优点。本文采用HPLC法，以SBE-β-CD作为流动相添加剂，在C8固定相上对尼莫地平的拆分进行了研究。考查了环糊精的种类、SBE-β-CD的浓度、有机改性剂的种类和浓度、pH值、柱温、流速对尼莫地平对映体分离的影响。

1仪器与试药

1.1试药见表1。



1.2仪器

Waters2695高效液相色谱仪，包含四元梯度泵、自动进样器、柱温箱（美国waters公司生产）；Empower工作站（美国waters公司生产），Waters2489型UV检测器（美国waters公司生产）；MSA225S-100-DA型分析天平（德国sartrious公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C8柱(150 mm×4.6 mm，5m)；流动相：水（pH2.5，含25 mmol·L-1 SBE-β-CD）-乙腈（58:42，V/V）；流速：0.8 ml·min-1；柱温：20℃；进样量：20l；检测波长：235 nm。

2.2样品溶液的配制

尼莫地平溶液：精密称取尼莫地平对照品适量，加流动相稀释制成浓度为5.0g·ml-1的溶液。

3实验结果与讨论

3.1环糊精的选择

首先考察了β-CD、HP-β-CD两种环糊精对分离的影响。两种环糊精未能实现对映体的基线分离。而在含有带负电的SBE-β-CD的流动相体系中，对映体可实现更好的分离。SBE-β-CD具有负电荷支链结构，更易与形成正电荷的尼莫地平产生亲和力和包合性，并能增加包合物稳定性[6]。本研究选用SBE-β-CD作为手性选择剂，对影响尼莫地平对映体拆分的因素进行了进一步考察。

3.2SBE-β-CD浓度对分离的影响

考察了不同浓度的SBE-β-CD（10、20、25、35 mmol·L-1）作为流动相添加剂对拆分的影响。结果表明，随着环糊精浓度的增加，分离度、选择因子α也随之增加，而保留因子k逐渐减小，结果见表2。这可能是因为SBE-β-CD浓度的增加，增加了其与尼莫地平对映体的包合机会，同时也加强了主客体包合物的稳定性，进而强化了手性识别作用。在考察的SBE-β-CD浓度范围内，当浓度达到25 mmol·L-1时对映体即可实现基线分离，考虑到环糊精浓度过高对色谱柱以及仪器使用寿命的不利影响，故分离时选择环糊精的浓度为25 mmol·L-1。



3.3pH值对对映体分离的影响

考察了pH值（2.5、3.0、4.0、5.0）对尼莫地平对映体分离的影响。由图1可见，考察的pH范围内，随着pH的增加，保留时间增加，而选择因子α无明显变化。综合考虑分离度，保留时间等因素，最终选择pH2.5作为最佳实验条件。实验结果表明：随着pH降低，k增大。SBE-β-CD分子中磺酸基团的存在使之在宽的pH值范围内带负电[7，8]，而吡啶环上的N在较低的pH值下更容易发生质子化，因而更易与带负电的SBE-β-CD进行结合，进而更早被洗脱出柱。

3.4有机改性剂种类和浓度对分离的影响

实验考察了甲醇和乙腈分别作为有机改性剂对对映体分离的影响。结果表明，用乙腈作有机改性剂时，对映体能达到完全分离[9，10]，而用甲醇作改性剂时，对映体仅能达到部分分离，因此本文最后选择乙腈作改性剂。

由表3可见，当乙腈含量由30%-50%变化时，随着组成的增大，分离度减小。但当乙腈体积分数较小时，保留时间也较长，峰形变差。当乙腈体积分数为45%时，尼莫地平对映体可以达到基线分离，因此最终选择乙腈体积分数为45%。

3.5缓冲盐对对映体分离的影响

考察了流动相中添加缓冲盐（三乙胺-冰醋酸、乙酸铵、磷酸二氢钠）和不加缓冲盐对对映体分离的影响。结果发现，是否添加缓冲盐对对映体分离的影响差别不大。因此，试验条件选择不加入缓冲盐。

3.6柱温对分离的影响

在本文的研究中，随着柱温的升高，尼莫地平对映体的分离度逐渐减小（图2）。其原因可能为，在柱温较高的条件下，对映体与环糊精包合物的稳定性较低，从而降低了手性识别作用。因此，选择20℃（室温）作为实验温度。



3.7流速对分离的影响

实验考察了不同流速对对映体分离的影响。较高流速可以缩短分析时间，但样品过快出柱不利于其与环糊精之间的
相互作用；流速减慢分离度会随之增加，但同时也会造成峰展宽，保留时间增加等不利因素。综合考虑，本实验选择流速为0.8 m l·min-1。综上，在上述实验条件下，对映体得到了较好的分离。分离谱图如图3所示。






4结论

本文采用SBE-β-CD作为手性添加剂，应用HPLC法成功拆分了尼莫地平对映体。优化的色谱条件为：水相（pH2.5，含25 mmol·L-1的SBE-β-CD）-乙腈(58:42，V/V)，流速0.8 ml·min-1，柱温20℃。在此色谱条件下，两对映体达到完全分离（R为1.6）。与手性固定相法相比，本文采用的方法简单、经济。同时，拓展了SBE-β-CD在HPLC中作为手性流动相添加剂拆分对映体研究方面的应用，对于尼莫地平对映体杂质检查及立体选择性药动学研究等方面具有理论和实际意义[11，12]。

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