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摘要：目的分析探讨高效液相色谱测定中药夏枯草活性成分含量。方法用含1%甲酸浓度为75%的乙醇溶液对夏枯草样品进行超声提取，分析色谱柱选择ODS-AP柱，流动相为乙腈-磷酸溶液（0.01%）实施梯度洗脱。结果熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸以及咖啡酸的质量浓度与其峰面积之间皆存在着线性关系，加样回收率平均值介于93.7-105.2%之间，RSD值皆未超过4.5%，夏枯草样品中测得的活性成分量分数介于0.0401-8.13mg/g-1之间。结论应用高效液相色谱对夏枯草活性成分含量进行测定，操作快速、简便，准确度高。
关键词：高效液相色谱；中药夏枯草；活性成分
本文引用格式：翟雪蓓,武晓媛,徐晓阳,等.高效液相色谱测定中药夏枯草活性成分含量[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(69):118.
0引言
夏枯草含有多种化学成分，如苯丙素类、香豆素类、黄酮类以及挥发油等，同时具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等生物活性[1]。其主要活性成分为熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸以及咖啡酸，但很多文献往往以单活性成分对其质量作出评价，本次研究旨在对夏枯草质量进行更为全面的评价，以更为可靠的依据作为其质量控制标准。详见如下报道。
1仪器与试药
1.1仪器。本次实验使用的高效液相色谱仪型号为岛津SPD-15C，泵技术设置参数具体为精度0.3%，压力在40MPa以内，流量范围控制在0.001-10.000 mL/min之间。辅助器材有可读性为0.01 mg的电子天平、柱温箱、超声波清洗器、真空脱气机以及自动进样器等。
1.2试药。熊果酸（CAS号：77-52-1；厂商：成都瑞芬思）、齐墩果酸（批号：H50020664；厂商：重庆青阳药业有限公司）、迷迭香酸（CAS号：20283-92-5，纯度98%以上；厂商：Solarbio）以及咖啡酸（CAS号：331-39-5；厂商：Solarbio）；夏枯草原材料产地有江西、广东、贵州、浙江、河南，其中野生夏枯草样本产自江西，其余为人工栽培；产自临海市浙东特种试剂厂的乙腈色谱纯试剂；自制双蒸水。
2方法与结果
2.1色谱条件。色谱柱选择ODS-AP柱，检测方式为波长切换：0-33 min为330 nm，33-40 min为203 nm；进样量50μl，柱温设定为20℃。流动相为乙腈-磷酸溶液（0.01%），实施二元洗脱。
2.2对照样品以及供试品溶液制备。首先是对照样品的制备：以精密仪器取迷迭香酸0.0115 g以及熊果酸0.0153 g，分别将其放置在10 mL瓶内；以精密仪器取咖啡酸0.0025 g以及齐墩果酸0.0112 g，分别将其放置在50 mL瓶内。应用甲醇溶液对上述试剂加以稀释，并将稀释液摇匀，分别得到0.212 g/L、1.59 g/L、0.051 g/L、1.21 g/L四种溶液，将其存放在冰箱中，冰箱温度保持在4℃左右。其次是供试品溶液制备：应用精密仪器取夏枯草粉末0.01g，并将其置入三角烧瓶，向烧瓶中匀速缓慢添加乙醇溶液20 mL（浓度为75%，含1%甲酸），静置半小时后进行半小时的超声提取，取上清液离心十分钟后过滤（微孔滤膜），所得续滤液即为供试品溶液。
2.3线性关系考察。分别精密吸取熊果酸对照品贮备液1000μL、齐墩果酸对照品贮备液400μL、迷迭香酸对照品贮备液160μL、咖啡酸对照品贮备液60μL置于10 mL量瓶，然后对甲醇溶液进行缓慢添加，并达到相应刻度。横坐标X表示对照品浓度，纵坐标Y表示峰面积，计算回归方程，结果显示各个化合物质量浓度与峰面积之间存在的线性关系良好。其中熊果酸线性范围为4.75-161.9 mg/L-1，齐墩果酸为0.61-20.7 mg/L-1、迷迭香酸为3.29-109.8 mg/L-1、咖啡酸为0.14-4.59 mg/L-1。
2.4加样回收率与质量分数考察。应用精密仪器称取含量已知样品各0.051g，并将其放置在25 mL不同量瓶中，继而将上述四种不同的对照品溶液加入其中，按照供试品溶液制备方法处理测定，完成测定会计算加样回收率与质量分数。夏枯草样品中咖啡酸的加样回收率为105.2%、质量分数为0.0401-0.0968 mg/g-1，迷迭香酸分别为96.13%、0.99-2.57 mg/g-1，齐墩果酸分别为93.7%、0.243-0.556 mg/g-1，熊果酸分别为98.54%、0.406-8.13 mg/g-1。
3讨论
夏枯草中药成分取其果穗，成熟季节在夏季，药用价值非常高，因此，对其活性成分及含量加以准确界定，对于发挥其全面的药用价值来说极为重要。测定其成分含量有多种途径，包括气相色谱法、薄层扫描法、紫外分光光度法以及高效液相色谱法等。本次研究结果与《中国药典》夏枯草含量要求熊果酸不能低于0.12 mg/g-1的要求相符[2-3]。
综上所述，应用高效液相色谱对夏枯草活性成分含量进行测定，操作快速、简便，准确度高，可有效对其活性成分含量加以测定，应用价值较高。
参考文献
[1]汤国茂.高效液相色谱测定中药夏枯草活性成分含量[J].北方药学,2016,13(4):4-5.
[2]曾敏.超声波辅助提取夏枯草多酚的研究前景[J].云南化工,2018,45(03):3-4.
[3]石磊,詹志来,杨钊,等.夏枯草药材商品的规格等级标准[J].中国现代中药,2017,19(04):575-578.
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