SCI论文（www.lunwensci.com）:
摘 要： 研究女贞子提取物及不同部位的抗氧化活性，为女贞子的开发应用提供基础。将女贞子用超声提取后，提取物（N1）用 D101 大孔树脂分离为水洗脱部位（N2）和百分之五十醇洗脱部位（N3），并进行各部位DPPH 自由基的清除能力测试。将 40 只小鼠随机分为 N1 组，N2 组，N3 组和对照组，用试剂盒测定小鼠血清MDA 含量、SOD 和 GSH-px 酶活性。女贞子提取物 N1 及分离部位 N2，N3 均有清除 DPPH 自由基的能力，水洗脱部位（N2）清除 DPPH 自由基的能力大大提高。可显著降低血清 MDA 含量，提高小鼠的血清及组织 SOD 和 GSH-px 活力。N2 体内外抗氧化活性均最高。女贞子提取物具有体内抗氧化活性，其中含有环烯醚萜苷类和花青素类的 N2 部位抗氧化能力最强，是良好的天然抗氧化剂。
关键词： 女贞子；DPPH；抗氧化；D101 大孔树脂；水洗部位
本文引用格式：刘尚智, 江洪波 , 张志强. 女贞子提取物抗氧化活性研究 [J]. 世界最新医学信息文摘,2018,18(74):99-100.
0引言
女贞子为木犀科植物女贞 Ligustrum lucidum Ait. 的干燥成熟果实，分布广泛，资源丰富，《神农本草经》列之为上品。现代医学研究证明，许多慢性疾病包括心血管、胃肠消化、内分泌、新陈代谢、呼吸等方面的疾病以及白内障、衰老和各类癌症等，都与人体内累积过多的氧自由基有关 [1]。近年研究发现女贞子及其化学成分具有较强的抗氧化活性[2-3]，能有效的清除自由基。女贞子中主要的化学成分有三萜类、环烯醚萜苷类、黄酮类、苯乙醇类、氨基酸、多糖、挥发油、花青素等。对女贞子提取物的不同部位体外抗氧化活性研究较多，但女贞子体内抗氧化活性研究未见报道。因此本文考察了女贞子的不同部位清除DPPH 自由基能力，并用女贞子的不同部位对小鼠进行灌胃处理，纯净水灌胃小鼠作为对照，测定比较女贞子乙醇提取物不同部位组小鼠与正常对照组小鼠血清的 SOD 活力、GSH-Px 及MDA 含量等来研究女贞子提取物不同部位的体内抗氧化作用， 为女贞子作为天然抗氧化产品的开发利用提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料。女贞子药材采自四川绵阳四川中医药高等专科学校校内（ 样品保存于四川中医药高等专科学校药物化学实验室内，编号 NZZ2016），经鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait. 的干燥成熟果实。
1.2仪器设备。SENCOR-201 旋转蒸发器（上海申顺生物科技有限公司）；SHZ- Ⅲ型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；TU-1900 型双光束紫外分光光度计（北京普析有限责任公司）；电子天平 OHAUS DV215CD；JP-100S 超声波提取仪（深圳洁盟设备有限公司）；TGL-16C 离心机（上海安亭科学仪器厂）；DNP-9052 电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）。
1.3试剂。DPPH（2，2- 二苯基 -1- 苦基肼，sigma）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD)）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-px）试剂盒、丙二醛（maleic dialdehyde,MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；D101 大孔树脂；无水乙醇；其余试剂为分析纯。
1.4实验动物。普通级昆明小白鼠，雌雄各半，10 月龄，合格证编号：SYXK（川）2013-113；小白鼠普通喂养饲料（四 川大学华西药学院）。
1.5女贞子测试样品的制备。取 500 g 女贞子，置于 5000 mL 三角瓶中，用无水乙醇浸泡24 h后，超声回流提取3 次，每次0.5 h， 料液比1:6。合并3 次提取液，由旋转蒸发仪浓缩抽干，得147.4 g， 将女贞子提取物（N1）于 4℃保存，备用。取女贞子提取物（N1） 约 100 g，分散于 1000 mL 水中，全部上样预处理好的 D101 大孔树脂柱，用水洗脱至无色，然后用 50% 乙醇水溶液进行洗脱， 洗脱至洗脱液无色为止。将水洗脱部分浓缩抽干，得女贞子水洗部浸膏（N2）44.5 g，将 50% 乙醇水溶液洗脱部分浓缩抽干， 得女贞子 50% 乙醇水溶液部浸膏（N3）29.8g。
1.6女贞子样品 DPPH·自由基的清除能力测试方法
1.6.1DPPH 溶液的配制。准确称取 20 mg DPPH，溶于95% 乙醇并定容于 250 mL 容量瓶中，配制成浓度为 2×10-4 mol·L-1DPPH 的标准溶液，冰箱 4℃保存备用。
1.6.2清除 DPPH 自由基能力测定。取样品 N1，N2，N3适量分别溶于 95% 乙醇，配制成 1 mg·mL-1 的溶液。向 10mL 比色管中依次加入 4mL pH6.86 标准混合磷酸盐缓冲液、4 mL 2×10-4mol·L-1 的 DPPH 溶液，摇匀。再加入 1mL 浓度为 1 mg·mL-1 的样品溶液，用蒸馏水补充体积至 10.00mL 刻度，充分混匀，10 min 后用 95% 乙醇作参比在 520nm 处测定其吸光度 [4]。按照以下公式计算样品对 DPPH·自由基的清除率：DPPH·清除率（%）= 。式中，Ai 为加抗氧化剂后 DPPH 溶液的吸光度；Aj 为不加 DPPH，只加抗氧化剂及水的溶液的吸光度；Ac 为不加抗氧化剂，只加 DPPH 及水的溶液的吸光度。每个样品重复3次，求得清除率的平均值。
1.7女贞子样品体内抗氧化作用研究。以小白鼠为实验对象， 通过测试小鼠血清中的 SOD 活力，GSH-Px 及 MDA 含量， 研究女贞子提取物及各部位在小白鼠体内的抗氧化作用。
1.7.1实验动物喂养及取样。小鼠适应喂养 5 d 后随机分成组：普通对照组，N1 组，N2 组和 N3 组，每组 10 只，雌雄各半。普通对照组每天灌胃 0.9% 生理盐水，N1 组，N2 组和 N3 组分别灌胃（女贞子提取物，女贞子水洗部，女贞子 50% 乙醇水溶液洗部）400 mg/kg，共给药 4 周。实验期间饲喂普通饲料，自由摄食和饮水，实验第28 d 空腹过夜。称重后眼眶采血，低温离心分离血清（4℃，3000 r/min，10 min），分别测定血清 SOD 活力，MDA 及 SOD 含量。
1.7.2数据处理方法。实验数据以 ±s 形式表示，采用 t 检验进行显著性检验，SPSS 统计软件进行统计比较。
2结果与分析
2.1 女贞子样品的DPPH·自由基的清除能力。如表 1 所示： 女贞子提取物（N1），女贞子提取物水洗脱部位（N2）和女贞子提取物 50% 醇洗脱部位（N3）在浓度 0.1 mg·mL-1 对 DPPH· 自由基的清除能力分别为46.25%，69.26%，58.59%。通过大孔树脂初步分离水洗脱的 N2 部位，在相同浓度时，相对女贞子提取液 N1 对 DPPH·自由基的清除能力提高了近 50%。50% 醇洗脱部位（N3）相对于提取原液N1 对 DPPH·自由基的清除能力也提高了26%。
女贞子样品的体内抗氧化水平。女贞子提取物（N1）， 女贞子提取物水洗脱部位（N2）和女贞子提取物 50% 醇洗脱部位（N3）组小鼠血浆内的 SOD，GSH-Px 活性（含量） 均比对照组升高，MDA 水平降低（P < 0.01）。且 N2 组（女贞子提取物水洗脱部位）血浆内的 SOD，GSH-Px 活性（含量） 比 N3 组（50% 醇洗脱部位）高，MDA 水平低。
3结论
女贞子提取物（N1）及经过 D101 大孔树脂分离得到的水洗脱部位（N2）和女贞子提取物 50% 醇洗脱部位（N3）均有较强的清除 DPPH·自由基的能力。水洗脱的 N2 部位主要含有水溶性的环烯醚萜苷类和花青素类等，有最强的DPPH·自由基的清除能力。N3 主要含黄酮类成分，清除自由基的能力也较提取原液强。体外清除自由基的能力强弱为：N2>N3>N1。
SOD 是存在于生物体内的一种重要的金属酶，它能催化生物氧化而产生的 O2- 转变成 H2O2 和 H2，起到保护细胞的作用 [5]。从表二可以看出，不同组血清 SOD 水平高低为：
N2>N3>N1>Control。参考对照组，经过 D101 大孔树脂分离得到的水洗脱部位 N2 组提高小鼠血清 SOD 水平最高。GSH-Px 的主要功能为清除生物体内的脂质过氧化物，并且能够在体内含过氧化氢酶（CAT）较少的组织中和 H2O2 产量较低的组织中替代低 CAT 清除 H2O2。不同组血清 GSH-Px 活力高低为：N2>N3>N1>Control。MDA 是脂质过氧化反应的产物，MDA 水平的高低间接反映体内自由基生成与清除的平衡状态。MDA 含量高低为：Control>N1>N3>N2。
表 2 结果显示，喂食女贞子提取物大孔树脂水洗脱部位（N2）组小鼠血清中 SOD 水平，GSH-Px 含量最高，MDA 含量最低。相对于对照组 SOD 水平，GSH-Px 含量分别增加15%，71%，MDA 含量降低 17%。女贞子组均有提高体内抗氧化能力的作用，但 N2（环烯醚萜苷类和花青素类等）组提高体内抗氧化能力最强，与体外清除DPPH·自由基能力相符。在一定程度上揭示了体外清除 DPPH·自由基能力与体内抗氧化能力之间的关系。
女贞子在我国分布广泛，资源丰富，在四川地区冬春季为鸟儿主要食物，可见无毒，是一种理想的天然抗氧化资源。因此对女贞子进行研究和将其开发成天然抗氧化剂或自由基清除剂，作为食品添加剂或保健品，对保障机体健康、预防疾病有重要意义。
参考文献：
[1]钟 秀 倩. 氧自由基 与疾 病 [J]. 韶 关学 院学 报 : 自然 科学,2006,27(6):87-90.
[2]边晓丽 , 王晓理, 李金娜, 等.6 种抗衰老中药清除氧自由基和抗脂质过氧化作用的测定 [J]. 西北药学杂志,2001,16(2):68-69.
[3]刘新 , 夏雪奎, 袁文鹏, 等. 女贞子体外抗氧化活性研究 [J]. 山东中医药大学学报 ,2010,34(4):364-365.
[4]赵艳红, 李建科, 李国秀. 天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化 [J]. 食品科学,2008,29(6):64-69.
[5]宫璀璀 , 郑玉霞 , 郑乃刚, 等. 金银花在体内抗氧化作用的实验研究[J]. 实用医药杂志 ,2006,23(5):584-585.
《女贞子提取物抗氧化活性研究论文》附论文PDF版下载：
http://www.lunwensci.com/uploadfile/2018/1126/20181126110746223.pdf
关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！
文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/1827.html
