基于PsbA-trnH序列蒙药山沉香DNA分子鉴定论文

SCI论文（www.lunwensci.com）:

摘要：目的建立蒙药山沉香PsbA-trnH序列DNA条形码分子鉴定方法。方法采用山沉香(Syringa pinnatifolia Hemsl.var.alashanensis Ma et S.Q.Zhou)植物样品15份，提取DNA、通过PCR扩增PsbA-trnH序列并测序、测序结果通过DNAMAN 7.0软件获得碱基，使用CodonCode Aligner17.0软件拼接得到相应的峰图。结果PsbA-trnH序列碱基长度为517bp。结论PsbA-trnH序列可以鉴定山沉香，为该药的分子鉴定提供新的技术和方法。

关键词：山沉香；PsbA-trnH序列；分子鉴定；蒙药

本文引用格式：木其尔,图雅,王秀兰,等.基于PsbA-trnH序列蒙药山沉香DNA分子鉴定[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(61):273-274.

0引言

山沉香(Syringa pinnatifolia Hemsl.var.alashanensis Ma et S.Q.Zhou)，除去皮的干燥根和枝干[1]。它是羽叶丁香(Syringa pinnatifolia Hemsley)的变种，别名为“阿拉善.阿嘎如”、贺兰山丁香，特色药材之一，味辛、苦，性凉，具有镇赫依、清热、止痛、平喘等功效，主治心赫依热、气喘、失眠、心跳、心绞痛等症[2]，主要分布在内蒙古阿拉善盟贺兰山保护区[3-4]。目前未见分子鉴定研究报道。本研究对山沉香的PsbA-trnH序列进行DNA分子鉴定研究。

1仪器与材料

JY200C型电泳仪，JY-SPC型电泳槽，Multigene Gradient PCR仪，QUANTUM凝胶成像系统，SIGMA 3K15高速冷冻离心机，离心柱型植物基因组DNA提取试剂盒，Taq Master Mix(Dye)，PsbA-trnH引物，DNA Marker、琼脂糖，其余试剂均为分析纯；本实验用山沉香经内蒙古民族大学包桂花教授鉴定为(Syringa pinnatifolia Hemsl.var.alashanensis Ma et S.Q.Zhou)的干燥根和枝干。

2方法与结果

2.1PsbA-trnH序列测定

根据文献[5]选择引物进行PsbA-trnH序列扩增，正向引物fwd:5'-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3';反向rev:5‘CGCGCATGGTGGATTC ACAATCC-3'。委托上海生工生物工程有限公司进行合成。

2.2总DNA提取

取样品适量研磨，用植物基因组DNA试剂盒提取总DNA，产物备用[6]。

2.3PCR扩增及电泳检测

PCR反应总体积50.0L，包含2×Es Taq MasterMix 25L,引物各2.0L（2.5mol/L），ddH2O 17L，总DNA 4.0L。扩增条件为94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s（进行35个循环），72℃延伸10min。同时以4.0L ddH2O作空白对照。从扩增产物中取5L反应液，经1.0％琼脂糖凝胶电泳[7-8]，其PCR产物检测结果见图1。





2.4测序

将扩增成功的PCR产物，送之北京华大测序部完成。

2.5数据处理

测序后所得序列分别利用DNAMAN 7.0和CodonCode Aligner17.0（CodonCode公司，美国）软件处理，去除引物及两侧低质量区，获得碱基序列和相应的峰图。结果见图2~3。



3结论

本实验分析山沉香样品的PsbA-trnH序列，结果显示所有实验样本的PCR扩增、测序成功率及序列获得率为100%，PCR产物均得到电泳检测，并有清晰明亮条带。说明PsbA-trnH在山沉香的鉴定中是有效的DNA区段，PsbA-trnH序列引物及其反应条件针对山沉香药用植物稳定性较好。

DNA条形码技术在物种鉴定以及相关领域的应用研究已成为现代生物学活跃的研究领域和新的热点问题之一，也是未来物种鉴定的发展趋势。基于核酸序列分析的DNA条形码鉴定技术是一种新的分子鉴定技术，与传统的物种鉴定方法和基于PCR或基于分子杂交的DNA分子鉴定技术相比，具有准确性高、效率高、不受被鉴定对象的环境及个体发育和人为因素影响等优点。同传统药用植物的形态、显微、理化鉴定方法一样，DNA条形码鉴定技术的准确性和稳定性也是业内研究的重点问题。

参考文献

[1]奥·乌力吉.蒙药山沉香现代化研究[M].赤峰:内蒙古科学技术出版社,2015:1.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册[M].1998.
[3]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材标准[M].赤峰:内蒙古科学技术出社,1987:360-361.
[4]朱亚民.内蒙古植物药志（第二卷）[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1989:349-350.
[5]陈士林.中药DNA条形码分子鉴定[M].北京:人民卫生出版社,2012.
[6]Li DZ,Liu JQ,Chen ZD,et al.Plant DNA barcoding in China.Journal of Systematics and Evolution,2011,49：165~168.
[7]Li M,Cao H,But PPH,et al.Identification of herbal medicinal materials using DNA barcodes[J].Journal of Systematics and Evolution,2011,49∶271~283.
[8]刘宇婧,刘越,黄耀江,等.植物DNA条形码技术的发展及应用[J].植物资源与环境学报,2011,20(1):74-82,93.


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