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摘要：目的分析研讨改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的作用。方法随机从我院2016年5月至2018年8月收治的鼻咽疾病患者中抽取90例进行讨论，患者均接受EBER原位杂交技术检测，分析EBER检测结果。结果90例患者均接受改良EBER原位杂交技术检测，21例NBLA患者中共3例患者为阳性（14.29%），呈灶状、散在阳性；32例NPC患者中，均为阳性（100.00%）；22例DLBCL患者中2例患者为散在阳性（9.09%）；15例ENKL患者中，均为强阳性（100.00%）。NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%，DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%，数据差异较大（P<0.05）。结论临床检查鼻咽肿瘤病理状况可考虑采用改良EBER原位杂交技术，操作简单，稳定性好，杂交时间短，灵敏度和准确性高，可为临床鉴别和诊断鼻咽肿瘤提供依据。
关键词：鼻咽；肿瘤；病理；EBER原位杂交技术
本文引用格式：张卫东.探究改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的应用[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(53):116,119.
0引言
人体鼻咽部处于软腭上、鼻腔后的咽腔，具有部位隐蔽、构成复杂的特征，受EB病毒感染、饮食习惯、环境因素等影响，鼻咽癌多发于此部位。EBER显色原位杂交技术（CISH）可定位，用此方式检查，可确定细胞、组织与病毒间的关系，目前，医学界公认的标准方式之一则为EBER原位杂交方式。常规EBER原位杂交检测方式操作复杂，杂交时间较长，易导致检验过程和结果不稳定或误差[1]，影响疾病预后和治疗。经医学界各医学者对常规EBER原位杂交检测方式改良优化后，已取得了一定认可和地位。为此，本研究共纳入90例鼻咽部疾病患者重点讨论改良EBER原位杂交技术诊断鼻咽肿瘤病理的作用，具体报告如下。
1资料及方法
1.1一般资料
随机从我院2016年5月至2018年8月收治的鼻咽疾病患者中抽取90例进行讨论，患者均接受鼻咽部病理组织活检，用中性甲醛溶液10%固定后，石蜡包埋切片后染色，厚度≤3μm，根据WHO组织制定的淋巴瘤分类诊断标准，用免疫组织化学标记物进行检测，确诊90例患者：鼻咽黏膜慢性炎或合并良性淋巴组织增生（NBLA）共21例，未分化型非角化性鼻咽癌（NPC）共32例，弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）共22例，结外NK/T鼻型淋巴瘤（ENKL）共15例。排出已接受放化疗治疗者。90例鼻咽疾病患者中包含男性59例，女性31例，年龄13~67岁，平均（45.3±1.2）岁。各患者各项资料均满足本研究要求和标准。
1.2方法
试剂：ZLI-9013胃酶工作液、ISH-5022-S型EBER原位杂交试剂盒、S500-24型原位杂交仪。
改良检测步骤：连续切片2~3μm，烤片≥2h（温度为58℃）。用二甲苯中做脱蜡处理2次，每次10min，放入无水乙醇内5min，共2次，干燥处理8min左右。原位杂交仪内37℃胃酶工作液内消化切片≥0.5h。用PBS溶液浸洗3次，每次2min，脱水处理后，在空气内做干燥处理。加入EBER探针10μL，盖玻片后做封边处理，杂交处理3h以上。完成杂交后，将橡胶水泥去除，用PBS液浸泡，自然脱落盖玻片，再用PBS液浸洗3次，每次2min滴加抗地高辛二抗，孵育0.5h以上，用PBS液浸洗3次，每次2min，显色后，做复染、脱水、透明、封片等处理，判定结果。
1.3指标判定
本次检测均由我院2名检验科专业且经验丰富的医生负责，EBER阳性：信号显示在细胞核，且颜色为深棕色。
1.4统计学方法
用统计学软件（SPSS13.0版本）分析数据，2检验计数资料，表示为（%），t检验计量资料，表示为（±s），若P<0.05则有统计学意义。
2结果
90例患者均接受改良EBER原位杂交技术检测，21例NBLA患者中共3例患者为阳性（14.29%），呈灶状、散在阳性。32例NPC患者中，均为阳性（100.00%）。22例DLBCL患者中2例患者为散在阳性（9.09%），15例ENKL患者中，均为强阳性（100.00%）。NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%，DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%，数据差异较大（P<0.05）。
3讨论
EBV编码的mRNA则为EBER，高拷贝存在于感染EB病毒后细胞核内。按照EBER RNA探针，可将其用于细胞涂片、冷冻切片、石蜡切片，其灵敏度、特异性较高，此为临床测定EBV的一项金标准，已在医学界得到广泛应用和一定认可。
改良EBER原位杂交检测与常规杂交检测比较，杂交时间更短，由原来的16h缩短为3h，操作步骤得到简化[2]。常规洗涤方式为58℃TBS液内洗涤，更改为常温PBS液内洗涤则可。此次研究结果显示，NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%，DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%，数据差异较大（P<0.05）。EBER原位杂交技术检测NBLA阳性，可推测存在潜在性EBV感染，此为高危癌前病变，需密切监测并随访，以便早期确诊并治疗鼻咽癌。本研究中可能因流行病学、实验样本数量等因素影响，结果存在一定片面性，但结果与以往报告结果相符[3]，提示，改良EBER原位杂交技术具有可靠性和稳定性。
改良EBER原位杂交检测成功率高，稳定可靠，但多种因素会影响染色结果，如：①组织固定：离体组织需用中性缓冲甲醇4%充分固定，时间>6h则可，反之基因易降解，发生信号微弱或无杂交信号[4]。②预处理切片：用带正电荷且洁净度高的黏附玻片，厚度为3μm或更薄，58℃环境下，至少烤2h，用新鲜无水乙醇和二甲苯脱蜡，并在空气中晾干后，再做消化处理，以降低假阴性。③胃酶消化：胃酶对靶核酸蛋白质有包围作用，组织通透性加大，探针渗透性增加，提升杂交成功率，此为检测是否成功的关键环节[5]。消化时间根据切片厚薄、固定时间、组织种类进行确定。所以，胃酶消化温度、时间的控制相当重要。反之也会发生假阴性状况。本研究内切片厚度为2~3μm，37℃环境下，切片时间均为0.5h或以上，杂交成功[6]。④孵育杂交：将探针滴加厚，加盖玻片过程中，需注意勿产生气泡，并完好封边，让其在湿盒中平整放置进行杂交，控制杂交湿度和温度、杂交时间为3h或以上，二抗也需在同等状况下进行孵育，反之会导致无杂交信号或减弱杂交信号，进而建议用自动原位杂交仪，确保条件稳定[7]。
⑤严重控制质量和操作程序：实验过程中，操作人员需佩戴手套和口罩，准确配制PBS液体，确保洗涤时间充足。建议实验由专业专人负责，监控质量，以确保实验结果稳定、理想。
综上，临床检查鼻咽肿瘤病理状况可考虑采用改良EBER原位杂交技术，操作简单，稳定性好，杂交时间短，灵敏度和准确性高，可为临床鉴别和诊断鼻咽肿瘤提供依据。
参考文献
[1]彭大云,张伟,陈晓东,等.改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的应用[J].实用医技杂志,2017,24(7):723-724.
[2]王弦.显色原位杂交技术在石蜡切片EBER检测中的应用[J].中国卫生标准管理,2018,10(3):128-130.
[3]吴国谦,毛志强,叶贝华.鼻咽癌患者外周血及肿瘤原发部位病毒检测的临床意义[J].中国肿瘤临床与康复,2015,10(7):789-791.
[4]张燕林,曹敏,余小蒙,等.淋巴结转移性鼻咽癌针吸检查中细胞块样本的应用[J].诊断病理学杂志,2016,23(11):821-824.
[5]Tsai S,Jin Y,Su I.Expression of EBER1 in primary and metastatic nasopharyngeal carcinoma tissues using in situ hybridization:A correlation with WHO histologic subtypes[J].Cancer,2015,77(2):231-236.
[6]陈应智,储兵,曾玉梅,等.CK、P63与原位杂交EBER在诊断复发性鼻咽癌中的应用[J].齐齐哈尔医学院学报,2015,10(6):787-789.
[7]Tsai S,Jin Y,Mann RB,et al.Epstein‐barr virus detection in nasopharyngeal tissues of patients with suspected nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer,2015,82(8):1449-1453.
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