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摘要：目的探讨应用流式细胞仪检测网织血小板的临床应用价值。方法2012年7月至2016年12月，本研究选取本院64例门诊和血液科住院患者的外周血标本，利用流式细胞仪测定外周血rP(％)，利用全自动血液分析仪测定血小板计数。结果健康体检组经检测后rP(％)值为（7.33±2.17），itP患者组rP(％)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P<0.01）。caa患者组rP(％)值为（5.82±1.26），明显低于健康体检组（P<0.05）。aMl患者组和Mds患者组rP(％)值分别为（8.26±2.45）、（8.12±2.59），与健康体检组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断提供了条件，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值。
关键词：流式细胞仪；网织血小板；检测；临床应用价值
本文引用格式：柴雪芳，斯南卓玛.利用流式细胞仪检测网织血小板的临床应用价值[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(85):214,216.
0引言
网织血小板(reticdated platelet，RP)是来源于巨核细胞的细胞颗粒，这种细胞颗粒中无核或DNA成分，但有一定的RNA含量，而且有能力合成少量的蛋白质，人们把这种RNA含量较高的年轻的血小板称之为网织血小板。其为骨髓新释放进入血液循环的血小板，它能够将骨髓血小板生成情况比较准确地反映出来[1]。本次研究以流式细胞仪对网织血小板实施检测，探索网织血小板变化的规律，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断创造条件。
1资料与方法
1.1一般资料
2012年7月至2016年12月，本研究选取本院患者的外周血标本64例，64例患者中32例为原发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者，15例为慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia，CAA)患者，10例为急性非淋巴细胞白血病(acute non-lymphocytic leukemia，AML)患者，7例为骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)患者，选取同期本院体检中心接收的40例健康体检者作为对照组，血小板检测结果在(100-300)×109／L，肝肾功能正常，将患有心血管疾病、高脂血症、糖尿病和其他内分泌疾病者排除[2]。
1.2仪器与试剂
本研究实验仪器为美国BD公司的FACS Calibur型流式细胞仪，流式细胞仪所用试剂也为该公司产品。CD41-PE及TO染液(贮存液为1 mg／ml溶解于乙醇，使用前无钙无镁PBS稀释，均购自上海优蒙生物科技有限公司)，工作浓度为1％(质量／体积)的甲醛。
实验方法：首先对患者的正常全血和待测全血进行提取，分别加入5μ1全血+5μ1抗体+50μ1／ml TO工作液，在室内避光处进行15min的孵育；将甲醛工作液1ml加入其中，45min内上机分析；正常全血染色管先上，对电压进行调节，控制血小板阳性率在1％左右，之后对样品管进行检测读出经荧光染料噻唑橙(thiarole orange，TO)染色的荧光强度，用(％)表示结果，即网织血小板百分比。
1.3统计学方法
研究得到的数据选择SPSS统计学软件实施分析，对全血和血浆结果的比较采用成对样本的t检验，使用（±s）表示，P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
两组分别进行检测后进行统计学分析比较，结果显示，健康体检组经检测后RP(％)值为（7.33±2.17），ITP患者组RP(％)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P<0.01）。CAA患者组RP(％)值为（5.82±1.26），明显低于健康体检组（P<0.05）。AML患者组和MDS患者组RP(％)值分别为（8.26±2.45）、（8.12±2.59），相比于健康体检组，无明显统计学差异(P>0.05)。见表1。
3讨论
血小板减少性疾病临床上比较多见，其主要原因包括：
①血小板生成减少；②血小板破坏增多；③血小板分布异常[3]。在一些兔疫性血小板减少的疾病中，由于血小板破坏增多，网织血小板代偿性增加，即RP的值相对增高。因此。检测网织血小板可以反映出血小板减少的原因，对临床治疗起着一定的指导作用。
近年来，用流式细胞术检测网织血小板的方法正在研究探讨中，其原理是TO透过血小板膜和血小板细胞质内RNA特异结合[4]，其结合RNA后，能够增大发射荧光强度的能力，达3000倍，血小板RNA含量和染色后荧光强度呈现出线性关系；含有RNA。可以被TO染色的网织血小板能够发出荧光，从而可以计数网织血小板在总血小板中所占的比例。
ITP为机体免疫系统故障，产生抗血小板自身抗体过度破坏而形成的一种血小板减少性疾病。其特点为血小板寿命变短，骨髓巨核细胞增多，80％-90％的患者能够检测出血小板IgG抗体。血小板相关抗体和血小板结合，增强对血小板的破坏，缩短其寿命，导致血小板变少[5-7]。而外周血血小板受到的破坏增加，随之带来骨髓中巨核细胞产生血小板的能力增强，显著提升血小板的更新速度，增加外周血中新生血小板数量，因此RPs(％)显著增加。本次研究选择ITP患者32例，检测网织血小板，结果RP(％)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P<0.01），差异有统计学意义。
CAA是一组因造血微环境缺陷而导致骨髓造血功能衰竭的疾病，血小板生成受到阻碍，骨髓中巨核细胞减少，新生血小板减少[8]。本研究中选取了15例CAA患者作为研究对象，统计学分析结果显示其RP(％)值明显低于健康体检组（P<0.05），这与临床诊断基本相似。统计学分析结果也显示，AML组及MDS患者组结果变化不明显，与健康体检组相比差异均无统计学意义(P>0.05)，分析原因可能与患者本身巨核细胞生成状态有关。
总之，利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断提供了条件，以发现网织血小板的变化规律，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值，尤其在原发性血小板减少性紫癜患者，慢性再生障碍性贫血患者血小板减少原因分析上意义显著。
参考文献
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[8]胡学婷，韩俏，马晶，等.通过网织血小板及JAK2V617F基因突变对原发性血小板增多症评估血栓发生率的研究[J]．世界最新医学信息文摘，2016，16（72）：100-101.
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