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摘要：目的 采用高效液相色谱法测定了痹祺胶囊和马钱子粉中马钱子碱和士的宁的含量。方法 采用 C18 色谱柱 (4.6mm×250mm,5μm), 以乙腈 - 水 - 磷酸（24：76：0.1，含 0.01mol/L 戊烷磺酸钠）为流动相，流速为 1mL/min, 检测波长为 260nm, 柱温为 30 。
结果 马钱子碱在进样浓度为 4.5ug-225ug/mL，士的宁在进样浓度为 50ug-250ug 范围内与峰面积具有良好的线性关系, 马钱子碱的相关系数为 0.9902, 士的宁的相关系数为 0.9909，痹祺胶囊中马钱子碱的平均加样回收率为 98.93%，士的宁的平均加样回收率为 99.01%。马钱子粉中马钱子碱的平均加样回收率为 99.69%，士的宁的平均加样回收率为 98.70%。
结论 本方法准确、重复性好、灵敏度高，可用于痹祺胶囊和马钱子粉的质量控制以及以马钱子为君药的配伍研究。
关键词：高效液相色谱法；马钱子碱；士的宁；痹祺胶囊；马钱子粉末
ABSTRACT:Objective To determin Brucine and Strychnine in Biqi Capsules and Semen StrychniPulveratumbyHPLC.Meth-ods C18column(4.6mm×250mm,5μm),acetonitrile-water-phosphoric acid(24 76 0.1,containing 0.01mol·L-1sodium amylsulfonate as mobile phase.The flow rate was 1mL·min-1;the detection wavelength was 260nm,the temperature of column was controlled at 30℃.
Results The calibration curve was liner in the range of 4.5ug-225ug·mL-1 for Brucine(r=0.9902).The calibration curve was liner in the range of 50ug-250ug·mL-1 for strychnine(r=0.9909).The average recovery rate of brucine in Biqi capsules was 98.93%,and the average recovery rate of strychnine was 99.01%.
The average recovery rate of brucine in semen strychni pulveratum was 99.69%,and the average recovery rate of strychnine was 98.70%.Conclusion This method is accurate,reproducible,and has high sensitivity.It can be used in capsules and Quality Control and Compatibility of Strychnine Powder.Conclution The method is accurate,repeatable and sensitive,which can be used for the quality control of Biqi Capsules and Semen Strychni Pulveratum.Also,it can be used for compatibility studies,with MaQianzi being the a king drug.
KEY WORDS:HPLC;Brucine;Strychnine;BiqiCapsules;Semen strychni pulveratum
0引言
“痹祺胶囊”是治疗风湿性关节炎的常用中成药。“痹祺胶囊”益气养血、祛风止痛，以马钱子为君药，主要由马钱子、川芎、党参、等药味组成[1]。用于治疗腰肌劳损、风湿性类风湿性关节炎等症。马钱子载于《本草纲目》，具有通络止痛、散结消肿的功效。
马钱子粉为马钱子的炮制加工品，其制备方法是取炙马钱子，粉碎成细粉，加适量淀粉勾兑，使含量符合规定即可。
马钱子含有生物碱，主要含有马钱子碱和士的宁，均有毒性。且士的宁的毒性远大于马钱子碱。痹祺胶囊引起的不良反应具有明显的年龄、性别、临床表现[2],笔者参考《中国药典》和有关文献[3-6]，采用反相高效液相色谱测定含量，来对马钱子碱和士的宁的含量进行监控是保证药品安全有效的重要措施。
1仪器与试药 A
美国waters2695型高效液相色谱仪，PDA紫外检测器，Empower3数据处理系统，马钱子、士的宁混合对照品（供含量测定用）购自中国食品药品检定研究院（批号：112030-201601）；痹祺胶囊由天津达仁堂药业有限公司提供（批号：30131666，规格：0.3g/粒）；马钱子粉（四川省中药饮片有限责任公司，批号：201705）。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2色谱条件
采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5m),流动相为乙腈-水-磷酸（24：76：0.1，含0.01mol/L戊烷磺酸钠），流速为1mL/min,检测波长为260nm,理论塔板数以士不低于 2500。对照品及样品色谱图见图 1。注：A.对照品；B.痹祺胶囊C.马钱子粉：1.马钱子碱；2.士的宁
3实验方法
3.1对照品纯度测定
采用面积归一化法对士的宁化学对照品进行纯度检查。取每1mL含马钱子碱0.45mg，士的宁0.5mg的溶液进样10ul,在本实验条件下，未见杂质峰，纯度接近99.99%。
3.2线性关系
精密称取马钱子碱、士的宁混合对照品10 mg,置10 m L容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 m L约含马钱子碱0.45 mg，含士的宁0.5 mg的溶液，精密吸取对照品储备液0.01mL,0.05mL,0.1mL,0.5mL,1mL分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10 ul测定。
以对照品浓度X（ug/m L）对峰面积积分值Y进行线性回归,见图2，马钱子碱的回归方程为Y=5599.6X+137829,r=0.9926;士的宁的回归方程为：Y=7706.5X+240564,r=0.9948。结果表明：马钱子碱在进样浓度为4.5ug-225ug/mL，士的宁在进样浓度为50ug-250ug范围内与峰面积具有良好的线性关系，近似为一条通过原点的直线。因此，采用外标一点法测定，
3.3加样回收率实验
精密称取6份已知含量的痹祺胶囊溶液1 mL（批号为301316，含马钱子碱0.212 mg/g,士的宁0.380 mg/g）相当于加入痹祺胶囊粉末约0.2 g,再精密称取6份已知含量的马钱子粉溶液1 mL（批号为201705，含马钱子碱2.21 mg/g,士的宁2.03 mg/g）相当于加入痹祺胶囊粉末约0.2 g精密加入0.05 mg/mL马钱子、士的宁混合对照品甲醇溶液1 mL,水浴挥干甲醇，以下按照“4.2”项下操作，并按“4.3”项下方法进样测定含量。
本方法中痹祺胶囊中马钱子碱的加样回收率为95.98%~99.52%，RSD为1.83%，士的宁的加样回收率为97.17%~102.21%，RSD为2.07%。马钱子粉中马钱子碱的加样回收率为98.24%~103.52%，RSD为2.19%，士的宁的加样回收率为97.03%~100.36%，RSD为2.07%。
3.4稳定性试验
取痹祺胶囊和马钱子的供试品溶液1份，在0，0.5，1，2，4，8，16，24 h分别按“4.3”项下方法进样测定含量。结果表明痹祺胶囊和马钱子粉的样品溶液在 24 h 内是稳定的。1.10%.（n=5）取马钱子粉对照品溶液，连续进样 5 次，以马钱子碱和士的宁峰面积计，马钱子碱、士的宁相对标准片差分别为1.26%，1.09%（n=5）。表明方法的精密度很好。
3.6 重现性试验
取痹祺胶囊一批，平行制备 5 份供试品，分别按“4.3”项下方法测定含量，测定结果马钱子碱、士的宁的相对标准偏差 1.57%， 1.12%（n=5）。取马钱子粉末一批，平行制备 5 份供试品，分别按 “4.3”项下方法测定含量，测定结果马钱子碱、士的宁的相对标准偏差 1.73%，2.30%（n=5）。表明本方法重复性良好。
4 样品测定
C 4.1 对照品溶液制备
精密量取对照品储备液 1mL, 置于 10mL 容量瓶中，用甲醇稀
3.5精密度试验
3.5.1对照品的精密度试验
取痹祺胶囊对照品溶液，连续进样 5 次，以马钱子碱和士的宁峰面积计，马钱子碱、士的宁相对标准片差分别为 1.28%， 1.20%（n=5）。表明方法的精密度很好。
3.5.2样品的精密度试验
取痹祺胶囊供试品溶液，连续进样 5 次，以马钱子碱和士的宁峰面积计，马钱子碱、士的宁相对标准偏差分别为 1.33%，释至刻度，摇匀，制成每 1mL 含马钱子碱 0.45mg, 含士的宁 0.5mg 的溶液，作为对照溶液。
4.2供试品溶液制备
分别取痹祺胶囊和马钱子粉 2g, 精密称定，置于 100mL 具塞锥形瓶中，加入浓氨试液 3mL, 混匀，再精密加入氯仿 50mL，称定重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密称量续滤液 10mL, 蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至 10mL 容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.22um 微孔滤膜滤过，得到痹祺胶囊和马钱子粉的供试品溶液。
4.3含量测定
取痹祺胶囊和马钱子粉各 2 批，分别按“4.2”项下所述方法操作，在上述色谱条件下进样测定，记录峰面积，分别记录峰面积， 分别计算痹祺胶囊和马钱子粉中的马钱子碱和士的宁的含量，结果见表 3，表 4。
5讨论
5.1测定波长的选择分别对士的宁和马钱子碱以流动相为溶剂制备对照品溶液，在波长200~300 nm范围内进行紫外扫描，马钱子碱和士的宁的最大吸收波长为265 nm和265 nm,参照《中国药典》2015年版一部马钱子粉项下含量测定方法，选择260 nm为测定波长。
5.2流动相及溶剂的选择
参照《中国药典》2015年第一部的方法，采用乙腈-0.01 mol/L戊烷磺酸钠与0.1%磷酸水溶液混合，系统为流动相，通过试验，将二者比例调至24：76（V/V）时，峰形较好，能达到基线分离的目的。对照品和供试品加流动相乙腈溶解时出现少量浑浊，超声后仍有微量沉淀，色谱峰形不能很好的分开，改用甲醇溶解后，沉淀消失，峰形较好，可以达到完全分离。
以上试验结果表明，本方法简便，稳定性好、精密度高，能有效的控制痹祺胶囊和马钱子粉的质量。可以进一步展开以马钱子为君药的配伍研究。
参考文献
[1]冯其帅,王贵芳,等.崔元璐痹祺胶囊水提取物及其单体成分抗炎活性比较[J].中国实验方剂学杂志,2016,22(3):89-93.
[2]方达飞,计建军,张慧.探析痹祺胶囊安全性及用药安全管理对策[J].中国医学高等教育,2017,2:133-134.
[3]段存贤,郭承军.HPLC法测定神农丸中士的宁与马钱子碱的含量[J].药物分析杂志,2018,38(2):331-335.
[4]王咏,陈军.马钱子总生物碱含量测定方法的建立与比较[J].西部中医药,2017,30(7):29-31.
[5]范莹莹,才毛,杨凤梅.七味马钱子丸的质量标准提高研究[J].中国药房,2017,29(2):163-167.
[6]刘菲,檀笑昕,等.在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定人尿液中的马钱子碱和士的宁[J].分析实验室,2017,36(8):923-926.
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