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为什么我的qpcr每次结果都不一样，结果无法复现是什么情况？小编为大家整理了有关qpcr的相关知识要点，一起看看吧！
pcr检测作为被经常用到的生物实验，身为科研工作者的我们绝对不会陌生，最近看到很多小伙伴反映即使是看了人家文献里的pcr检测方法，照搬了人家的引物，结果还是做得每次结果都不一样。qpcr是不是会做不好呢?为什么我的qpcr每次结果都不好，小编总结了几个原因，看看能不能帮到你！
第一点，你基本不会用移液器做PCR检测！
移液枪，尤其是微量移液枪，长时间操作的速度非常快，也就是说，弹簧没有来得及恢复，又再次按下去，极易对你的拇指关节造成损伤。好吧，这都是其次的，重点是您的移液量可能会有所不同。
所以，照顾好你的拇指，在吸液的时候按住它1-2秒，给弹簧一个缓冲。当然，在添加模板的时候，增加添加到模板中的样本量，也可以尽可能的减少每次添加样本的误差。
吸取液体时，需要将移液器的尖端插入半月板的底部，而不是半月板的侧面。侧面更容易产生气泡：
当然，你会说吸头的尖端每次都插得很深，但这样的话，很容易在吸头的尖端沾上液滴，容易造成进样量的误差添加少量模板时添加。
第二点，是由于不良原因造成的RNA降解！
当然，也是RNA完整性的问题。RNA的完整性一般通过电泳时18S和28S的亮度来体现。如果这两条带中RNA的亮度变低甚至消失，则意味着RNA的完整性应该降低。有损失。RNA完整性受损的原因有很多，例如：
包括镁离子、酸碱度、温度、紫外线、福尔马林等都会对你的RNA产生影响。所以，处处小心。所以有人做了这样一个实验，就是针对RNA的降解，有没有办法降低RNA降解对qPCR的影响。
他们分析了3'和5'末端的扩增CT值，以及长片段和短片段的ΔCT，发现RNA的完整性缺失与3'和5'端关系不大结束，但短片段会比长片段大。扩增效率更高。因此，在设计qPCR引物的过程中，尽量设计短的片段。
第三点，也是比较难解决的，就是inhibitor！
逆转录或PCR过程中可能存在抑制剂。这些抑制剂，如Na离子、EDTA、SDS、苯酚、血红素、腐植酸等，都会影响qPCR的结果。具体体现在扩增曲线上会如下：
事实上，去除抑制剂的唯一方法是在提取过程中尽可能地洗掉抑制剂，而在其他操作中实际上没有办法这样做（添加促进剂可能会导致不稳定）。
好吧，让我们看看你们在pcr检测操作中有没有哪一类的问题，看看你们的扩增曲线有没有什么奇怪的变化，然后，我们一起改进吧！
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