摘要：通过对峨眉山天麻中主要活性成分天麻素的含量测定研究，为进一步深入研究天麻资源学与可持续利用提供科学依据。使用色谱柱为Hypersic BDS C18(200 mm×φ4.0 mm，5μm)，柱温为30℃,检测波长为220 nm，流动相为体积比3∶97的乙腈-0.05%H3PO4溶液，流速为0.8 mL/min的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进行含量测定。测定出峨眉山天麻两组样品中主要活性成分天麻素的平均含量分别达到0.532 3%和0.423 2%，均大于0.020 0%，而且理论塔板数均超过10 000，远高于2020年版《中国药典》规定标准。峨眉山天麻中主要活性成分天麻素含量比较高，有很高的药用价值和资源开发利用价值。
关键词：峨眉山天麻,主要活性成分,天麻素,含量测定
0引言
天麻为常用名贵中药，别名为定风草、神草等，属兰科多年生草本植物天麻的块茎。在2020年版《中国药典》中描述天麻为：性味甘、平，归肝经，具有平抑肝阳、息风止痉、祛风通络的功效，用于肢体麻木、小儿惊风、破伤风、癫痫抽搐、头痛眩晕、风湿痹痛、手足不遂等症[1]。药理研究表明，天麻素是天麻中的主要生物活性成分之一，天麻素在国家药品标准收录为中枢神经系统药物[2]，具有镇静、镇惊、抗癫痫、抗惊厥、安眠等作用[3]，在临床上，主要用于治疗耳鸣和耳聋、头痛、眩晕、神经衰弱、周围神经病变、癫痫、中风后遗症等[4-5]。天麻素又名天麻甙，分子式为C 13H 18O7，其化学名为4-羟基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷，是天麻质量控制评价的主要指标。峨眉山市属亚热带湿润性季风性气候，有四季分明、冬暖夏凉、空气湿润、降水充沛、日照极少的特点[6]，非常符合天麻喜凉爽、湿润、少直射光的生长环境。本文采用简便准确、仪器精密度高的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对峨眉山天麻中主要活性成分天麻素的含量进行测定研究，为进一步开发利用峨眉山天麻提供参考。
1仪器与试样
1.1仪器
高效液相色谱仪，岛津LC-20AT；Waters 2487双波长紫外检测器；色谱柱：Hypersic BDS C18(200 mm×φ4.0 mm，5μm)；KQ2200DB型超声波清洗机，江苏昆山超声仪器有限公司；SatoriusBS224S型电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；AKAKUP-TV-10型超纯水机，江苏太仓振大水处理器材有限公司。
1.2药品与试剂
峨眉山天麻，购于峨眉山报国寺药材市场，烘干粉碎，过4号筛保存；天麻素对照品，中国药品生物制品检定所，批号：110807-200205；乙腈，色谱纯，成都市科龙化工试剂厂；甲醇，色谱纯，天津科密欧化学试剂厂；其余试剂均为国产，分析纯。
2实验方法
本品含量测定方法参照2020年版《中国药典》一部天麻药材[含量测定]项下进行。
2.1色谱条件
流动相：体积比为3∶97的乙腈-0.05%H3PO4溶液；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；设定流速为0.8 mL/min、柱温为30℃、检测波长为220 nm的参数条件进行测定，按天麻素峰计算理论板数应高于5 000。
2.2流动相的制备
先量取85%的H3PO4溶液0.29 mL，放置于1 000 mL的容量瓶中，用超纯水稀释定容，摇匀后获得0.05%的H3PO4溶液。量取30 mL乙腈，放置于1 000 mL的容量瓶中，用0.05%的H3PO4溶液稀释并定容，摇匀后获得流动相为体积比3∶97的乙腈-0.05%H3PO4溶液。
2.3对照品溶液的制备
准确称取在80℃下干燥1 h的天麻素对照品0.005 1 g，放置于10 mL的容量瓶中。用体积比3∶97的乙腈-0.05%H3PO4溶液溶解并定容，摇匀后用刻度吸管准确吸取1.0 mL于10 mL的量瓶中，再用体积比3∶97的乙腈-0.05%H3PO4溶液稀释并定容，即制成浓度为51μg/mL的天麻素对照品溶液。
2.4供试品溶液的制备
取供试品在80℃减压干燥后粉碎，准确称取过4号筛的两份粉末0.805 4 g和0.807 2 g，分别倒入具塞锥形瓶中，加入50 mL稀乙醇溶解，称重后，加热回流提取3 h，冷却后再称重，用稀乙醇补充重量。过滤后，量取滤液10 mL，浓缩干燥后，用体积比3∶97的乙腈-水混合溶液进行溶解，转移至10 mL量瓶中定容。分别从上述溶液中精确量取1 mL，倒入10 mL量瓶中，用体积比3∶97的乙腈-水混合溶液定容，摇匀后过滤，取续滤液后分别获得天麻素样品溶液A和B。
2.5天麻素对照品溶液的测定
分别精确吸取天麻素对照品溶液2、4、6、8、10、12μL，注入高效液相色谱仪中，在设定波长为220 nm、柱温为30℃、流速为0.8 mL/min的参数条件下进行测定，并用峰面积对天麻素量绘制标准曲线。
2.6天麻素含量测定
分别精确吸取天麻素样品溶液A和溶液B 6、8、10μL注入高效液相色谱仪中，在设定波长为220 nm、柱温为30℃、流速为0.8 mL/min的条件下进行测定，根据测定的结果绘制标准曲线，然后通过所得的线性回归方程测定天麻素的含量。
3实验结果
3.1标准曲线的绘制
3.1.1天麻素对照品溶液的测定结果
天麻素对照品溶液的测定结果如表1所示，结果表明：天麻素的出峰情况良好，理论板数符合2020年版《中国药典》中天麻药材[含量测定]项关于按天麻素峰计算理论板数应不低于5 000的要求。
3.1.2标准曲线的绘制
根据表1中的数据绘制标准曲线，数据的统计结果及统计命令在Excel中完成。图1为在Excel中绘制出的天麻素标准溶液曲线图。
由图1得天麻素对照品溶液标准曲线的线性回归方程(n=6)为：y=764 414.76x-17 353.72，相关系数r=0.999 93，线性范围为0.102～0.612μg。故天麻素进样量在0.102～0.612μg时与峰面积呈良好的线性关系。
3.2天麻素的含量测定结果
3.2.1天麻素样品溶液测定结果
天麻素样品溶液测定结果如表2所示，结果表明：天麻素的出峰情况良好，理论板数均大于10 000，符合2020年版《中国药典》天麻药材[含量测定]项中按天麻素峰计算理论板数高于5 000的要求。
3.2.2天麻素样品溶液中天麻素含量测定
天麻素的含量测定结果如表3所示，结果表明：两组天麻素样品溶液中天麻素平均含量分别达到0.532 3%和0.423 2%，符合2020年版《中国药典》中天麻药材[含量测定]项“按干燥品计算，含天麻素(C 13H 18O7)不得少于0.20%”的规定，可见峨眉山天麻中天麻素含量比较高。
4分析与讨论
本研究参照2020年版《中国药典》一部中天麻药材[含量测定]项下以波长220 nm、柱温30℃、流速0.8 mL/min的色谱条件进行，即用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定峨眉山天麻中主要活性成分天麻素的含量。结果表明：峨眉山天麻两组样品中天麻素平均含量分别达到0.532 3%和0.423 2%，均大于0.20%，而且理论塔板数均超过10 000，完全符合2020年版《中国药典》天麻药材[含量测定]的有关规定。测定天麻素样品所得的色谱图效果较好，天麻素吸收系数大，杂质干扰小，准确度高，色谱峰形、分离较好，获得了较满意的结果。可见，峨眉山天麻中主要活性成分天麻素的含量比较高，预示其有良好的药用开发前景。
在天麻素的提取和含量测定实验过程中，存在以下一些问题:
首先,天麻素样品溶液的制备中采用了两个浓度的稀乙醇,样品A采用的是50%,样品B采用的是70%,最终测定所得天麻素的含量存在偏差,用50%稀乙醇提取出的天麻素含量高于用70%的稀乙醇提取的。结果表明,乙醇浓度对天麻素的提取有较大的影响。
其次,在样品溶液的天麻素含量测定所得的色谱图中,发现了3个较明显的未知峰,其出峰情况如表4所示。
参考文献:
[1]国家药典委员会.中国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2020.
[2]国家药典委员会.国家药品标准·化学药品地标升国标第十六册[S].北京:中国医药科技出版社,2003.
[3]岑信钊.天麻的化学成分与药理作用研究进展[J].中药材,2005,10(28):958-961.
[4]张念祖,夏立军,穆文清,天眩清治疗眩晕、耳鸣的临床观察[J].中国中西医结合耳鼻喉科杂志,2003,11(4):164-166.
[5]董玉娟,刘俊艳,任士卿,等.天麻素注射液治疗前庭神经元炎52例临床分析[J].中国全科医学,2005,8(12):1008.
[6]刘开发.峨眉山气候研究[J].西南科技大学学报(哲学社会科学版),1992,3(9):44-47.
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